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目的:观察血管紧张素-(1-7)对TGF-β1诱导幼年大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响,并探讨其是否通过cAMP/PKA通路进行介导抗纤维化作用。方法:1.细胞分离培养与鉴定:用酶消化法分离细胞,差速贴壁法纯化获得心室肌成纤维细胞为材料,用光学显微镜和免疫细胞化学的方法鉴定细胞。2.检测方法:WST-1比色法测定细胞增殖情况,放射免疫法测定Ⅲ型胶原前体序列(PCⅢ)的含量。3.实验分组:根据不同药物及药物不同浓度,将实验共分四部分,第一部分:观察Ang-(1-7)对基础状态下的心肌成纤维细胞是否有影响。共分5组:不同浓度(10-9-10-6M)Ang-(1-7)组和空白对照组。第二部分:观察Ang-(1-7)对TGF-β1诱导下对心肌成纤维细胞的影响。空白对照组, TGF-β1组,不同浓度的Ang-(1-7)(10-9-10-6mol/L)+TGF-β1组。第三部分:H-89对基础状态下心肌成纤维细胞的影响。空白对照组, Ang-(1-7)组,H-89组,H-89+ Ang-(1-7)组。第四部分:H-89对TGF-β1诱导下对心肌成纤维细胞的影响;分5组。空白对照组, TGF-β1组,TGF-β1组+ H-89组,TGF-β1+ Ang-(1-7)组,TGF-β1+ Ang-(1-7) + H-89组。4.数据处理:用SPSS13.0软件包;细胞活度OD值(吸光度)数据用均数±标准差(x±s)表示,单因数方差分析进行统计学处理,两两比较采用LSD法,检验水准为P<0.05有统计学意义。结果:1.培养的细胞经过光学显微镜和免疫细胞化学的方法鉴定为心肌成纤维细胞,纯度95%以上。2. Ang-(1-7)在基础状态下呈浓度依赖性抑制心肌成纤维细胞增殖和PCⅢ的合成。Ang-(1-7)各浓度组(10-9-10-6mol/L)OD值及PCⅢ的合成明显高于空白对照组(P<0.05),OD值及PCⅢ的合成随浓度的增加而降低,各浓度组之间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3. Ang-(1-7)呈浓度依赖性地抑制TGF-β1的诱导心肌成纤维细胞增殖及胶原PCⅢ的合成作用。4. Ang-(1-7)在cAMP/PKA通路的研究。1)PKA抑制剂H-89能阻断Ang-(1-7)对TGF-β1的抑制细胞增殖和胶原PCⅢ的合成作用,与TGF-β1+ Ang-(1-7)及空白对照组比较P<0.05,与TGF-β1组比较无明显差异(P>0.05)。2)基础状态下,H-89能阻断Ang-(1-7)对细胞增殖和胶原PCⅢ合成抑制作用,与Ang-(1-7)组比较差异明显P<0.05,与空白组对照比较无明显差异。结论:1.Ang-(1-7)对基础状态下心肌成纤维细胞增殖和胶原合成有抑制作用。2.Ang-(1-7)对TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成有抑制作用。3.Ang-(1-7)对TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成的抑制作用可能是通过cAMP/PKA通路介导的。