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为探讨白藜芦醇对蛋鸡肝细胞脂肪变性PPARα信号通路的调控机理,通过改良原位二步灌流法获得了高活性蛋鸡原代肝细胞,依据人体非酒精性脂肪肝等体外模型,使用混合脂肪酸(油酸:棕榈酸为2:1)处理肝细胞建立脂肪变性模型,分为四组,分别为Control组(正常培养的原代肝细胞)、FA组(Control组+1.0 mM脂肪酸)、FA+Res组(FA组+80μM白藜芦醇)、Con+Res组(Control组+80μM白藜芦醇)。然后测定细胞活性,抗氧化指标(SOD、MDA),脂质相关指标(TG、TC、HDL-ch、LDL-ch),凋亡基因(Bcl-2、BAX、Caspaes-3)以及PPARα信号通路相关基因(ADFP、FABP1、FABP3、PPARα、Srebp-1c、Apo-A1、Apo-B100、SCD-1)mRNA表达量,此外,还利用慢病毒构建过表达载体从而使肝细胞中PPARα基因过表达,结果如下:(1)通过细胞活性检测及脂质相关指标检测,确定当培养基中添加1.0 mM脂肪酸48h时,为最佳造模条件,在添加0.5-1.2mM的脂肪酸时,相比于Control组,TG含量均极显著上升(P<0.01)。(2)与Control组相比,FA组SOD活性极显著下降,且MDA含量显著升高(P<0.05),而FA+Res组情况明显得到改善;与Control组相比,FA组TG和TC含量极显著升高(P<0.01),而与FA组比较,FA+Res组TG和TC含量极显著下降(P<0.01)。(3)与Control组相比,FA组BAX、Caspase-3显著上升(P<0.05),而Bcl-2mRNA含量显著下降(P<0.05)。与FA组相比,FA+Res组Caspase-3 mRNA含量显著下降(P<0.05)。(4)与Control组相比,FA组ADFP、FABP1、FABP3、Srebp-1c、Apo-A1 mRNA含量极显著上升(P<0.01);PPARα、Apo-B100、SCD-1 mRNA含量显著下降(P<0.05或P<0.01),与FA组相比,FA+Res组Srebp-1c、FABP1、FABP3、ADFP均极显著下降(P<0.01)。(5)PPARα慢病毒过表达的转染效果:MOI值为125及以下时显示无荧光,而MOI值达到150及以上时出现绿色荧光,但是原代肝细胞转染效率极低,没有达到预期值;选择传代PK-15细胞进行检验,在MOI达到5时,转染效率达80%以上。综上所述:本实验成功建立了由1mM脂肪酸(棕榈酸:油酸=2:1)诱导的蛋鸡原代肝细胞脂肪变性模型。白藜芦醇能够通过调控蛋鸡肝细胞脂肪变性PPARα信号通路相关基因的表达来改善脂质沉积水平。