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目的 建立一种简便快速的筛查中国人非缺失型α-地中海贫血点突变的反向点杂交（reverse dot blot，RDB）技术，使之可以应用于临床诊断及大人群筛查工作中。 方法 1．标准DNA样品准备及罕见突变样品的构建：DNA的抽提按经典的酚-氯仿抽提法，DNA样品经测序确定基因型作为本实验的标准样品。罕见突变样品αCD30α，αCD59α和αWSα的构建是通过基于PCR设计的人工致突变反应体系从野生型样品中制备所需点突变的目的基因，再运用经典的基因工程技术将诱变得到的目的基因进行克隆并测序鉴定。 2．RDB膜条的制备：设计、合成寡核苷酸探针，5’端加-NH3标记。膜条的制备由本实验室完成。 3．PCR选择性扩增人α2珠蛋白基因：合成特异性扩增α2珠蛋白基因的引物C1、C3，将生物素直接标记在引物5’端上，以DNA样品及诱变成功的质粒为模板，用这一对引物可以选择性地扩增出一长1,085bp的α2珠蛋白基因，包含了中国人已发现的6种非缺失型α-地贫的突变位点。可以直接用于杂交。 4．杂交：将PCR产物与固化在膜条上的寡核苷酸探针杂交，洗膜、显色后分析结果。 结果 采用生物素标记的引物Bio-C1和Bio-C3可选择性扩增α2珠蛋白基因，PCR产物长度为1,085bp，该标记片段与固定在膜条上的寡核苷酸探针构成的反向点杂交检测体系，可以分辨出中国人群中已知的6种非缺失型α-地贫血点突变，与DNA序列测定结果完全吻合，且本法操作较现有诊断非缺失α-地贫其他方法简便易行，故可用于临床快速诊断中国人非缺失型α-地中海贫血点突变。 结论 该反向点杂交检测体系膜条制备简单快速；无需用巢式PCR扩增产物，一步选择性扩增的α2珠蛋白基因产物即可用于杂交；无需进行检测标记物（如生物素）反应，而将生物素直接标记在引物上；无需不同的洗膜条件，一次可同时检测6种不同非缺失型a-地贫点突变，故较已报道的同类方法更为简便易行.我们应用该技术与PCR-SSCP和PCR-TGGE技术对非缺失型Q-地贫进行了对比分析，进一步证实该技术是快速诊断非缺失型Q-地贫的有效方法。