【摘 要】
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植酸酶是一种能将植酸磷（六磷酸肌醇）降解为肌醇和无机磷酸的酸性磷酸酶类.因单胃动物如猪、鸡等的消化道内缺乏植酸酶,使得其对饲料中以植酸磷形式存在的磷的生物利用率大大降
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植酸酶是一种能将植酸磷（六磷酸肌醇）降解为肌醇和无机磷酸的酸性磷酸酶类.因单胃动物如猪、鸡等的消化道内缺乏植酸酶,使得其对饲料中以植酸磷形式存在的磷的生物利用率大大降低.植酸酶作为单胃动物的饲料添加剂,不但可使植物性饲料中磷的利用率提高60﹪、粪便中磷的排泄量减少40﹪,同时还能降低植酸的抗营养作用,因而有广阔的应用前景.由于很难找到一种产酶量很高的天然产植酸酶菌株和植酸酶的热稳定性问题一直不能得到很好的解决,到目前为止植酸酶在饲料中并没有得到广泛的推广和应用.该研究参考Hartingsveldt已发表的Aspergillus niger NRRL3135的植酸酶基因phyA序列,设计并合成了一对引物,采用PCR的方法,以A.Niger NRRL3135的总DNA为模板,扩增出不包括信号肽序列的植酸基因phyA,经限制性内切酶处理后将其克隆到载体pBluescript(KS)上,得到重组质粒pHNKP,然后将phyA转克隆至大肠杆菌一毕赤酵母穿梭载体pPIC9K上,得到重组质粒pHN8P,经酶切验证其插入方向的正确性之后,通过电转化的方法,将Phn9P整合到毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115的染色体上,得到阳性转化子.经过以重组酵母总DNA为模板进行PCR扩增以及采用含有植酸钙的选择性培养基初步检测结果表明,植酸酶基因（phyA）在毕赤酵母中得到了表达,摇瓶发酵的上清酶活在第6天达到249.57U/ml.
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