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目的:研究干预炎症信号通路NF-κB及内质网应激对动脉粥样硬化的作用:1)通过重组腺相关病毒介导的IκBα过表达抑制NF-κB信号通路的激活,研究对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化（AS）斑块的作用和对NF-κB下游因子表达的影响;2)通过药物尼可地尔干预动脉粥样中的内质网应激中凋亡相关蛋白和NF-κB信号通路,研究其对动脉粥样硬化小鼠的调控作用。方法:1)8周龄ApoE-/-小鼠分别给予高脂饮食和普通饮食8,12,16,20,24周后,检测血脂表达情况,油红O染色观察斑块面积。通过尾静脉注射AAV9-CMV-eGFP,5.0×1011vg/只/100μl,转染ApoE-/-小鼠。WB及激光共聚焦方法检测绿色荧光蛋白在粥样斑块内的表达情况。观察腺相关病毒对ApoE-/-小鼠肝功、肾功、心肌酶的影响。通过AAV9转染心肌细胞、肝脏细胞后使用TUNEL方法检测细胞凋亡情况;2)重组腺相关病毒介导的IκBα过表达对ApoE-/-小鼠AS的抑制作用:将8周龄雄性ApoE-/-小鼠分为空白对照组、AAV9-GFP空载病毒组和AAV9-IκBα病毒干预组,每组25只。生理盐水对照组小鼠尾静脉注射生理盐水,剩余两组小鼠分别给予注射AAV9-CMV-GFP空病毒或腺相关病毒IκBα载体（AAV9-CMV-IκBα）。干预后继续高脂喂养5周后,麻醉处死。检测血脂指标;油红O染色法检测动脉血管的脂质斑块面积;HE染色法检测小鼠主动脉血管粥样斑块的面积;天狼猩红染色法检测斑块的胶原含量;免疫组化检测斑块巨噬细胞（MOMA-2）和平滑肌细胞（SMC）,炎症因子比例;实时荧光定量法测定炎症因子的mRNA表达;免疫印迹法及免疫荧光检测主动脉血管NF-κB通路相关蛋白;3)药物尼可地尔抑制内质网应激和NF-κB通路,对ApoE-/-小鼠AS的抑制作用,实验分三组:生理盐水对照组,尼可地尔组,阿托伐他汀组,每组各25只小鼠。三组ApoE-/-小鼠喂养16周后,分别给予生理盐水,尼可地尔和阿托伐他汀灌胃治疗,药物灌胃连续治疗8周后,将小鼠麻醉处死。检测血脂指标。油红O染色法检测脂质斑块面积;HE染色法检测斑块的面积;天狼猩红染色法检测斑块的胶原含量;免疫组化法检测斑块内内质网应激标志蛋白GRP78和CHOP,以及巨噬细胞、平滑肌细胞、炎症因子的比例;实时荧光定量法测定小鼠主动脉组织炎症因子的mRNA表达;免疫印迹法检测主动脉血管内质网应激凋亡相关蛋白JNK、P-JNK、Caspase-12等及nf-κb通路相关蛋白的表达。tunel方法检测斑块内细胞凋亡情况。结果:1)血脂检测结果显示高脂饮食组总胆固醇（tc）、甘油三酯（tg）和低密度脂蛋白（ldl-c）水平显著高于普通饮食组（p<0.05）,油红o染色结果显示高脂饮食组形成斑块病变比普通饮食组更快（p<0.05）,apoe-/-小鼠高脂饮食喂养16周时可形成稳定的动脉粥样模型。aav9-egfp病毒转染as小鼠后,其主动脉血管激光共聚焦和westernblot结果显示raav9-egfp可有效转染小鼠主动脉粥样斑块并持续表达,病毒转染在第35天达高峰。转染病毒后的apoe-/-小鼠血清中心肌酶、肝功、肾功较对照组小鼠无显著变化（p>0.05）,aav9-gfp病毒转染心肌细胞和肝细胞,未对两者的凋亡产生影响（p>0.05）。2)与对照组和空载病毒组相比,iκbα干预组小鼠的动脉脂质斑块面积和粥样斑块面积无明显减少（p>0.05）。但iκbα小鼠组较生理盐水对照组和空载病毒组显著改善了粥样斑块的稳定性:生理盐水对照组、aav9-gfp空载病毒组和aav9-iκbα三组,天狼猩红染色检测斑块内胶原成分百分比分别为9.50±2.21;9.31±2.62;16.43±1.83;aav9-iκbα较其他两组胶原含量显著增加（p<0.01）,巨噬细胞含量的百分比分别为27.91±3.32;28.5±3.21;17.84±3.35;平滑肌细胞含量的百分比分别为9.32±2.36;9.90±2.42;16.83±2.21;aav9-iκbα组较对照组和空病毒载体组巨噬胞含量显著减少,而显著增加了斑块内的平滑肌的含量（p<0.01）。三组小鼠斑块易损指数分别为1.24±0.20;1.25±0.18;0.54±0.14;aav9-iκbα组较生理盐水对照组和aav9-gfp空病毒组易损指数显著降低,改善了斑块的稳定性（p<0.01）。iκbα干预组无论是蛋白水平还是mrna基因水平较生理盐水对照组和空载病毒组均可显著下调斑块内炎症因子il-6（p<0.05）、tnf-α（p<0.05）、趋化因子mcp-1（p<0.05）及金属基质蛋白酶mmp-2（p<0.05）的表达。iκbα基因过表达可以阻遏nf-κb通路的激活,抑制p-p65蛋白表达（p<0.05）;aav9-iκbα转染后,斑块内蛋白p65免疫荧光核转位水平较生理盐水对照组和aav9-gfp空载病毒组明显下调（p<0.05）。3)尼可地尔组和阿托伐他汀组与生理盐水组比较,均可抑制动脉粥样硬化斑块的进展。三组小鼠间体重、血压、血脂无明显差异（p>0.05）。rt-pcr检测三组小鼠的主动脉mrna,尼可地尔组和阿托伐他汀组较生理盐水组可显著降低内质网应激相关蛋白grp78和chopmrna的表达（p<0.05）;ihc结果示:grp78蛋白在生理盐水对照组小鼠、尼可地尔组小鼠、阿托伐他汀组小鼠斑块内的百分率分别为22.31±3.32;15.33±3.21;10.64±2.35（p<0.01）;chop蛋白的百分率分别为12.40±2.57;8.80±2.16;4.90±2.20（p<0.01）。油红o大体染色脂质斑块在三组小鼠间大体血管内皮的沉积分别为50.4±4.63、43.4±3.41、37.7±3.12（%）,尼可地尔组或阿托伐他汀组与生理盐水组比较均可显著降低脂质斑块沉积（p<0.05）;三组小鼠斑块易损指数分别为1.44±0.20;0.77±0.14;0.52±0.15;尼可地尔组或阿托伐他汀组与生理盐水对照组比较可显著降低斑块易损指数（p<0.05）。尼可地尔组或阿托伐他汀组可从蛋白及基因水平降低斑块内的炎症因子的表达（P<0.05）。尼可地尔组和阿托伐他汀组均可抑制内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP、P-JNK、Caspase-12的表达,上调凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax（P<0.05）;TUNEL检测两组均可抑制斑块内的细胞凋亡（P<0.05）;还可以显著上调IκBα（P<0.05）,抑制P-P65蛋白表达（P<0.05）,阻遏NF-κB通路的激活。结论:1)AAV9-CMV-GFP病毒尾静脉注射转染AS模型ApoE-/-小鼠,可以持续在粥样硬化斑块中表达,转染高峰在35天左右,血清学检测未发现明显的心脏、肝脏和肾脏毒性,具有一定的安全性,可作为基因治疗动脉粥样硬化的良好载体;2)通过AA9病毒作为载体,使IκBα基因在形成AS的ApoE-/-小鼠过表达后,靶向抑制小鼠主动脉斑块NF-κB信号通路的激活,稳定斑块,下调NF-κB信号通路下游的炎性靶基因的表达,从而抑制动脉粥样硬化的进展;3)动脉粥样内质网应激和NF-κB是过度激活的,尼可地尔通过抑制内质网应激凋亡和上调NF-κB中IκBα表达水平,抑制NF-κB信号通路的激活,抑制斑块炎症反应,减少小鼠动脉粥样硬化斑块形成,稳定斑块,从而达到抑制动脉粥样硬化的作用。