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长非编码RNA即200nt以上的非编码RNA，来自基因间、基因内、基因上游区域或者形成自然反义转录本，广泛参与基因表达的调控，是基因表达过程中非常重要的协调者。AS1DHRS4是本实验室发现的DHRS4基因自然反义转录本，该基因位于染色体14q11.2，DHRS4基因编码的蛋白NRDR（NADP(H)-dependent retinol dehydrogenase/reductase）是全反式维甲酸合成的关键酶。我们的研究已经验证了AS1DHRS4招募G9a、HDAC1和EZH2等通过表观遗传调控的方式调控NRDR的表达，但是除此之外AS1DHRS4招募的其他蛋白及其功能目前仍不明确，也就不能确定其参与的更多功能。因此本实验通过两种方法全面研究AS1DHRS4结合蛋白。 我们以前运用RACE技术得到了AS1DHRS4的全长序列，利用该序列我们构建了pcDNA3.0-AS1DHRS4-MS2bs共表达载体，将其与pcDNA3.0-FLAG-MS2共转染进入细胞，交联或者非交联提取裂解液后利用FLAG tag antibody进行RNA IP，AS1DHRS4结合的蛋白随之聚集到最终产物中，最终通过LC-ESI-MSMS蛋白质谱分析其中的蛋白。除了MS2-MS2bs RNA IP之外，我们还通过PIRP方法pull down富集AS1DHRS4，同样通过蛋白质谱分析与之结合的蛋白。 我们的结果发现：MS2-MS2bs RNA IP中交联比非交联方法结合了更多蛋白，PIRP方法相对MS2-MS2bs RNA IP特异性更高。分析MS2-MS2bs RNA IP蛋白质谱结果发现，AS1DHRS4与T复合体（含TCP1的伴侣蛋白）结合，说明其与蛋白折叠密切相关；结合的CALR（钙网织蛋白）不仅与囊泡转运相关，还与蛋白折叠相关，说明AS1DHRS4可能进入外泌体中参与转运；结合的ALDOA（果糖二磷酸醛缩酶）可参与形成脚手架，可能是AS1DHRS4招募蛋白复合体的关键蛋白。分析PIRP蛋白质谱结果发现，AS1DHRS4与 HDAC1、PHB2等表观遗传调控蛋白结合，与HDAC1结合验证了之前的论文的表观遗传调控结论；与延伸因子、起始因子及剪接因子等结合则提示了AS1DHRS4在基因表达调控和加工过程中的作用。 总的来说，本实验为进一步研究AS1DHRS4的表观遗传调控等功能打下了基础，也为研究其他lncRNA的功能及其分子调控机制提供参考，有助解析它们在疾病发生、发展中的病理机制。