【摘 要】
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疟疾仍是世界性的严重威胁人类生命和健康的公共卫生问题,而准确有效的诊断方法对于此病的有效控制具有重要意义.被广泛研究的恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ(HRP-Ⅱ)是最具诊断价值的
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疟疾仍是世界性的严重威胁人类生命和健康的公共卫生问题,而准确有效的诊断方法对于此病的有效控制具有重要意义.被广泛研究的恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ(HRP-Ⅱ)是最具诊断价值的分子之一.本课题首先通过设计一对引物以我国恶性疟病人和非洲恶性疟病人血样为材料扩增HRP-Ⅱ基因片段,该片段编码主要由AHH和AHHAAD形成的连续串联氨基酸重复序列.用GENEDOC软件比较两者间的同源性,结果显示两片段两端的序列高度同源,从我国恶性疟病人血样扩增出的HRP-Ⅱ基因片段核苷酸序列不但有多个长短不等序列的缺失和一18个核苷酸残基序列的插入,而且还有10个碱基发生了突变.比较推导的两氨基酸序列可以看出,除了有多个长短不等氨基酸序列的缺失和插入外其它氨基酸残基没有发生改变.在序列比较的基础上将从我国恶性疟病人血样扩增出的HRP-Ⅱ基因片段进行克隆和表达,以此表达的重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,经筛选获得4株单克隆抗体.将这4株单克隆抗体对疟疾病人血样进行免疫印迹试验,结果显示这4株单克隆抗体对我国恶性疟病人血样均能识别一60kDa的单一条带,对非洲的恶性疟病人血样均能识别—74kDa的单一条带,而对我国间日疟病人血样则无识别条带.初步结果显示制备的单克隆抗体具有特异性强的特征,这为以后研制诊断疟疾的产品打下基础.
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