论文部分内容阅读
目的：基于已构建的稳定表达野生型PTEN、野生型表皮生长因子受体(EGFRwt)和突变型表皮生长因子受体(EGFRvⅢ)的多形性胶质母细胞瘤(GBM)细胞，检测celecoxib对不同表型GBM细胞功能的影响，探讨非甾体抗炎药(NSAIDs)对GBM细胞的抗肿瘤作用。 方法：应用RT=PCR和Western Blot的方法分别从基因和蛋白水平检测外源基因PTEN、EGFRwt和EGFRvⅢ在三种U87MG派生细胞中的表达状态。用全基因组芯片检测三种U87MG派生细胞中炎症相关基因的表达水平。应用MTT法检测celecoxib对三种U87MG派生细胞的增殖抑制作用。分别应用粘附实验、平板集落形成实验和细胞划痕实验检测celecoxib对三种U87MG派生细胞的粘附、集落形成和迁移能力的影响。 结果：U87MG派生细胞稳定表达转染基因PTEN、EGFRwt和EGFRvⅢ，可以用于后续功能实验；EGFR的突变/过表达伴抑癌基因PTEN的突变性缺失导致了GBM细胞中炎症相关基因表达水平的变化；随celecoxib浓度的增加，对三种不同表型U87MG派生细胞的增殖抑制作用均逐渐增加，呈剂量依赖型，celecoxib对三种细胞的IC50浓度均高于60μmol/L，且=60μmol/％的celecoxib对三种细胞的增殖抑制作用无显著差异，=80μmol/L的celecoxib对U87-PTEN和U87-EGFRwt细胞的增殖抑制作用显著高于对U87-EGFRvⅢ细胞(p<0.05)；在三种U87MG派生细胞中，U87-EGFRwt细胞的迁移和粘附能力最强，40μmol/L的celecoxib能明显抑制三种U87MG派生细胞的迁移和粘附，且对U87-EGFRwt细胞的抑制作用显著强于另外两种细胞(p<0.05)；U87-EGFRwt细胞的集落形成能力显著强于U87-PTEN和U87-EGFRvⅢ细胞(p<0.05)，10μmol/L的celecoxib能抑制三种细胞的集落形成(p<0.05)，对U87-EGFRwt细胞的抑制作用显著强于对U87-PTEN和U87-EGFRvⅢ细胞(p<0.05)，U87-EGFRvⅢ细胞对10μmol/L的celecoxib表现出明显的抗性。 结论：较高浓度(=80μmol/L)的非甾体抗炎药celecoxib能显著抑制表达野生型EGFR和PTEN基因的U87-EGFRwt和U87-PTEN细胞的增殖；在三种U87MG派生细胞中，U87-EGFRwt细胞的迁移、粘附和集落形成能力最强，非甾体抗炎药celecoxib能明显抑制三种不同表型U87MG派生细胞的迁移、粘附和集落形成；表达野生型EGFR的U87-EGFRwt细胞对celecoxib最敏感，而表达突变体EGFR的U87-EGFRvⅢ细胞对celecoxib抵抗。