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大量的流行病学调查及基础研究、临床观察均已显示血浆高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)水平与动脉粥样硬化的发病率呈负相关。B类I型清道夫受体(Scavenger receptor class B type I, SR-BI)是第一个在分子水平上得到证实的高密度脂蛋白(High density lipoprotein, HDL)受体,其主要功能是介导高密度脂蛋白胆固醇酯(High density lipoprotein-cholesterol ester,HDL-CE)的选择性摄取和细胞内未酯化胆固醇的流出。载脂蛋白E(Apolipoprotein E,apoE)是富含三酰甘油脂蛋白的蛋白组分之一,作为乳糜微粒(Chylomicron,CM)残粒受体和低密度脂蛋白(Low density lipoprotein,LDL)受体的配体在脂蛋白残粒的代谢中起重要作用。尽管当前已有大量关于SR-BI和apoE的研究报道,但对于apoE和SR-BI这两个脂质代谢关键基因之间的关联关系目前并不完全清楚。为此,本实验检测了ApoE-/-小鼠腹膜巨噬细胞SR-BI表达及其介导的胆固醇转运的变化,为进一步阐明apoE和SR-BI之间的关联关系提供依据。第一部分:ApoE-/-小鼠腹膜巨噬细胞SR-BI表达及胆固醇转运的变化目的:探讨ApoE-/-小鼠腹膜巨噬细胞SR-BI表达及胆固醇转运的变化。方法:以ApoE-/-小鼠腹膜巨噬细胞为实验组,具有相同遗传背景的C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞为对照组, RT-PCR、Western blotting检测SR-BI mRNA转录和蛋白表达水平变化,高效液相色谱检测细胞内脂质蓄积情况,液体闪烁计数法检测胆固醇流出率。结果:RT-PCR、Western blotting检测ApoE-/-小鼠和C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞SR-BI mRNA转录和蛋白表达水平变化,结果显示,与对照组相比,ApoE-/-小鼠腹膜巨噬细胞SR-BI mRNA转录及蛋白表达下调(P<0.05);高效液相色谱检测表明,ApoE-/-小鼠腹膜巨噬细胞的总胆固醇含量、游离胆固醇含量、胆固醇酯含量以及所占比例(分别为116.9±9.3mg/g蛋白、84.2±4.1 mg/g蛋白、32.7±3.7%mg/g蛋白、28.0±2.5%)明显高于对照组(分别为75.3±6.8mg/g蛋白、67.8±3.6 mg/g蛋白、7.5±1.8%mg/g蛋白、9.9±1.2%),差异具有显著性意义(P<0.05);液体闪烁计数法检测也发现,ApoE-/-小鼠腹膜巨噬细胞胆固醇流出率(35.18±4.85%)明显低于对照组(56.39±6.63%),差异具有显著性意义(P<0.05)。小结:1、ApoE-/-小鼠腹膜巨噬细胞SR-BI表达下调。2、ApoE-/-小鼠腹膜巨噬细胞总胆固醇和胆固醇酯含量增高,胆固醇酯所占比例上升。3、ApoE-/-小鼠腹膜巨噬细胞的胆固醇流出率下降。第二部分:脂质转运阻断剂BLT4对小鼠腹膜巨噬细胞SR-BI表达及其介导的胆固醇转运的影响目的:观察脂质转运阻断剂BLT4对小鼠腹膜巨噬细胞SR-BI表达及其介导的胆固醇转运的影响。方法:以ApoE-/-小鼠腹膜巨噬细胞+DMSO溶媒对照或+100μmol/L BLT4为I组、II组,具有相同遗传背景的C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞+DMSO溶媒对照或+100μmol/L BLT4为III组、IV组。RT-PCR、Western blotting检测SR-BI mRNA转录和蛋白表达水平变化,高效液相色谱检测细胞内脂质蓄积情况,液体闪烁计数法检测胆固醇流出率。结果RT-PCR、Western blotting检测ApoE-/-小鼠和C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞实验组和对照组SR-BI mRNA转录和蛋白表达水平变化,结果显示,分别与各自的对照组相比,ApoE-/-小鼠和C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞BLT4组SR-BI mRNA转录和蛋白表达无明显变化;高效液相色谱检测表明,ApoE-/-小鼠和C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞BLT4组的总胆固醇含量、游离胆固醇含量、胆固醇酯含量以及所占比例(分别为173±10.4mg/g蛋白、110.6±9.8 mg/g蛋白、62.4±6.7%mg/g蛋白、36.0±3.8%与100.5±7.8mg/g蛋白、75.4±4.1 mg/g蛋白、25.1±3.2%mg/g蛋白、25.0±2.2%)均明显高于各自的对照组(分别为123.2±10.3mg/g蛋白、89.8±3.9 mg/g蛋白、33.4±3.5%mg/g蛋白、27.3±2.5%与77.6±5.2mg/g蛋白、69.1±3.6 mg/g蛋白、8.5±1.7%mg/g蛋白、10.9±1.4%),差异具有显著性意义(P<0.05);液体闪烁计数法也发现,ApoE-/-小鼠和C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞BLT4组的胆固醇流出率(分别为25.38±4.12%与32.66±4.97%)明显低于各自的对照组(37.45±5.12%与54.39±7.64%),差异具有显著性意义(P<0.05)。小结:SR-BI脂质转运功能受BLT4抑制后小鼠腹膜巨噬细胞胆固醇流出率下降,总胆固醇和胆固醇酯蓄积增多。