【摘 要】
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本文围绕牛亚洲I型和牛O型口蹄疫病毒Vp1表位所构建的24种重组表位蛋白，从编码基因序列及密码子选择、mRNA最小自由能、氨基酸种类及组成及发酵条件等方面，对24种重组表位蛋白
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本文围绕牛亚洲I型和牛O型口蹄疫病毒Vp1表位所构建的24种重组表位蛋白，从编码基因序列及密码子选择、mRNA最小自由能、氨基酸种类及组成及发酵条件等方面，对24种重组表位蛋白在大肠杆菌中表达水平的影响因素进行了分析，发现精氨酸等亲水氨基酸、肽链疏水性、基因序列及密码子选择等都不同程度地影响蛋白的表达水平，但蛋白质结构及编码基因序列信息对重组蛋白的设计具有一定的指导意义。为了研究重组抗口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Diease Virus, FMDV)表位蛋白的氨基酸序列和基因序列对其在大肠杆菌中表达水平的影响因素，我们从GeneBank中查找FMDV的Vp1蛋白的氨基酸序列，用氨基酸Linker将不同的B表位和T表位以任意串联的形式组合成不同分子量大小的24个多表位重组表位肽(multiple-epitope polypeptieds, MEP)。另外，我们利用大肠杆菌偏爱的密码子替换原来FMDV相应的稀有密码子，通过引物搭建PCR方法合成24个新的编码重组表位肽的基因序列，使其在大肠杆菌中表达，并鉴定其表达量。利用生物信息学网络服务器分别分析24个重组表位肽的编码基因序列的组成（包括编码基因的密码子、GC含量和Nc等参数）、其mRNA的最小自由能和其氨基酸的组成(不同性质的氨基酸组成、等电点、亲水性和疏水性等)，并与其表达量进行相关性分析。结果表明：（1）重组表位蛋白的表达量与其编码基因的GC含量成正比。（2）重组表位蛋白的表达量与亲水氨基酸的含量成正比。在上述研究基础上，我们在中试水平验证了重组蛋白的高密发酵表达受其氨基酸组成和基因GC含量的影响。
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