论文部分内容阅读
目的： 探讨异氟烷预处理是否通过调控Beclin1-Vps34复合体功能对大鼠心肌缺血再灌注损伤产生保护作用。 方法： 第一部分：雄性SD大鼠48只，3～4月龄，体重200～250克，采用随机数字表法分为以下四组(n=12)：假手术组(Sham组)、异氟烷预处理组(ISO组)、缺血再灌注组(I/R组)、异氟烷预处理+缺血再灌注组(ISO+I/R组)。ISO组吸入1.5%异氟烷30min，洗脱15min；I/R组采用结扎左冠状动脉前降支30min，再灌注4h的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型；ISO+I/R组吸入1.5%异氟烷30min，洗脱15min，后按I/R组方法制备心肌缺血再灌注损伤模型。采用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色方法检测大鼠心肌梗死面积；Elisa方法检测心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平；western blot方法检测Beclin1、Vps34、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62、Lamp-2和GAPDH的表达水平 第二部分：雄性SD大鼠96只，3～4月龄，体重200～250克，采用随机数字表法分为以下八组(n=12)：假手术组(Sham组)、异氟烷预处理组(ISO组)、缺血再灌注组(I/R组)、异氟烷预处理+缺血再灌注组(ISO+I/R组)、Vps34抑制剂3-MA组(3-MA组)、3-MA+异氟烷预处理组(3-MA+ISO组)、3-MA+缺血再灌注组(3-MA+I/R)、3-MA+异氟烷预处理+缺血再灌注组(3-MA+ISO+I/R组)。3-MA组实验前2h腹腔注射3-MA40mg/kg；3-MA+ISO组经3-MA处理后，1.5%异氟烷预处理30min，洗脱15min；3-MA+I/R组经3-MA处理后，制备缺血再灌注损伤模型；3-MA+ISO+I/R组经3-MA处理，同ISO+I/R组。采用TTC染色方法检测大鼠心肌梗死面积；Tunnel染色法检测心肌细胞凋亡水平；western blot方法检测 Beclin1、Vps34、和 GAPDH的表达水平；采用CO-IP方法检测Beclin1、Vps34的共表达。 结果： 第一部分：与 Sham组比较，I/R组Beclin1、Vps34、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62表达水平升高(P<0.05)，Lamp-2水平降低(P<0.05)；与I/R组比较，ISO+I/R组Beclin1、Vps34、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62表达水平降低(P<0.05)，Lamp-2水平升高(P<0.05)，心肌梗死面积减小(P<0.05),血清cTnI水平降低(P<0.05)。 第二部分：与Sham组比较，ISO组Beclin1、Vps34表达水平无显著差异(P﹥0.05)，但Beclin1、Vps34共表达水平升高(P<0.05)；与ISO组比较，3-MA+ISO组Beclin1 表达水平无明显差异(P﹥0.05)，Vps34水平降低(P<0.05)，Beclin1、Vps34共表达水平降低(P<0.05)；与I/R组比较，ISO+I/R组Beclin1、Vps34表达及共表达水平降低(P<0.05)，Tunnel染色示心肌细胞凋亡水平降低，caspase-3水平降低(P<0.05)，心肌梗死面积降低(P<0.05)；与ISO+I/R组比较，3-MA+ISO+I/R组Beclin1、Vps34表达水平升高(P<0.05)，共表达水平降低(P<0.05)，心肌凋亡水平增加，caspase-3水平升高(P<0.05)，心肌梗死面积明显增加(P<0.05)。 结论： 异氟烷预处理通过增加 Beclin1、Vps34共表达，提高自噬水平，减轻心肌细胞凋亡，对心肌缺血再灌注损伤产生保护作用。