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目的:(1)阐明膀胱癌细胞DR4、DR5基因甲基化状态与DR4、DR5表达的关系;(2)研究膀胱癌细胞TRAIL耐受与DR4、DR5基因甲基化状态的关系。
方法:采用RT-PCR技术检测膀胱癌T24细胞、BIU87细胞表面DR4、DR5 mRNA表达,对低表达或无表达DR4、DR5膀胱癌细胞采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测DR4、DR5启动子甲基化状态。同时应用流式细胞仪检测TRAIL组以及TRAIL+5-氮杂胞苷组细胞凋亡状态。
结果:RT-PCR研究发现:膀胱癌T24细胞无DR4、DR5表达,MSP法研究显示:DR4、DR5基因呈甲基化状态,对TRAIL诱导的凋亡表现为耐受状态(100ng/mlTRAIL,凋亡率7.6%),经去甲基化试剂5-氮杂胞苷处理,T24细胞DR4、DR5表达随处理时间而增加,100ng/mlTRAIL凋亡率达29.2%;BIU-87细胞表达DR4,DR5并对TRAIL敏感(100ng/mlTRAIL凋亡率30.4%),应用5-氮杂胞苷处理BIU87细胞,DR4、DR5表达无差异,100ng/ml TRAIL时,细胞凋亡率31.7%,DR4、DR5基因呈非甲基化状态(MSP法)。
结论:膀胱癌T24细胞DR4,DR5启动子区域甲基化与TRAIL耐受有关,去甲基化处理可逆转上述耐受状态,可为TRAIL的下一步临床应用提供基础研究资料。