论文部分内容阅读
多氯联苯（polychlorinated biphenyls, PCBs）是广泛存在于自然界的环境类激素化合物，可通过模拟天然激素作用或干扰天然激素在体内的合成、分泌、结合、代谢等过程，引起靶器官损害和致毒性能，降低靶器官对天然激素的敏感性，对动物的内分泌功能产生影响和危害，从而严重影响机体的生长发育、生殖功能。怀孕动物早期暴露于PCBs中会导致受精卵的着床率下降，胚胎发育异常，胚胎植入前退化，动物生殖能力降低。故本研究运用典型的类二噁英多氯联苯Aroclor1254建立大鼠肝细胞和子宫内膜细胞损伤模型及胚胎着床障碍模型，研究槲皮素对Aroclor1254所致的大鼠胚胎着床障碍的作用机制，为中药预防和治疗环境类激素所致动物生殖机能障碍，提高家畜的繁殖力提供理论依据。1.体外试验：分离和培养怀孕大鼠的肝脏和子宫内膜细胞，通过MTT法确定10μg/mL Aroclor1254是导致怀孕大鼠肝脏和子宫内膜细胞损伤的最适浓度。通过RT-PCR、Western blot、ELISA等方法研究发现，Aroclor1254损伤的肝细胞肿大，出现空泡，胞质少，轮廓不清晰，TNF-α和IL-6的含量显著升高（P＜0.05）。10μmol/L槲皮素处理损伤的肝细胞后，细胞的空泡化得到明显改善，CYP1A1、CYP2B1及CYP2E1的表达随槲皮素浓度的增加和处理时间的延长而呈升高的趋势，TNF-α和IL-6的含量显著降低（P＜0.05）。Aroclor1254损伤的子宫内膜细胞皱缩，部分细胞肿胀，胞质减少，甚至出现空泡，TNF-α、IL-6和E2的含量显著升高（P＜0.05），P4的含量显著降低（P＜0.05）；50μmol/L槲皮素处理损伤的子宫内膜细胞24h后，细胞的损伤现象明显好转，CYP2B1的表达呈升高趋势，子宫内膜细胞中TNF-α、IL-6和E2的含量显著降低（P＜0.05），P4的含量显著上升（P＜0.05）。2.体内试验：（1）不同浓度的Aroclor1254灌服孕4-7d大鼠，RT-PCR和Western blot法检测大鼠肝脏及子宫中CYP1A1、CYP2B1、CYP2E1mRNA和蛋白的表达，ELISA法检测肝脏、子宫及血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、E2和P4的含量，并观察肝脏和子宫的组织病理学形态，确定Aroclor1254阻碍大鼠胚胎着床的最适浓度。研究发现，不同浓度的Aroclor1254处理怀孕大鼠后，胚胎着床率随Aroclor1254浓度的升高而下降（P＜0.05），发育延迟胚和退化变性胚比率呈上升的趋势（P＜0.05）。CYP1A1、CYP2B1和CYP2E1的表达随Aroclor1254浓度的升高而呈上升的趋势。肝脏、子宫及血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2和IL-6的含量显著升高（P＜0.05），IL-4的含量显著下降（P＜0.05）。肝脏和子宫的组织病理学形态变化明显：肝索排列紊乱，肝细胞肿大，细胞内出现空泡；子宫壁增厚，平滑肌细胞排列呈旋涡状，子宫腺上皮细胞出现空泡。1mg/100g体重Aroclor1254为建立胚胎着床障碍模型的最适浓度。（2）灌服不同浓度的槲皮素后，随着槲皮素浓度的升高，怀孕大鼠的胚胎着床率随之升高，发育延迟胚和退化变性胚比率呈下降趋势。肝脏和子宫中CYP1A1、CYP2B1、CYP2E1的表达在槲皮素浓度为15mg/100g体重时下降最明显，其它组变化不大。肝脏、子宫及血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2和IL-6的含量下降（P＜0.05），IL-4的含量呈上升趋势（P＜0.05）。肝脏和子宫组织病理学变化明显减轻，肝索呈放射状排列，细胞的空泡数量明显减少，子宫内膜上皮完整，内膜增厚，腺体数量增多。子宫中CD4+T细胞数量呈下降的趋势（P＜0.05），CD8+T细胞的数量增加不明显，使子宫内的免疫平衡向Th2方向偏移。综上所述，Aroclor1254可损伤大鼠的肝细胞和子宫内膜细胞，并导致怀孕大鼠的胚胎着床障碍。槲皮素可以明显拮抗Aroclor1254所致的损伤，使损伤的肝脏得到修复，子宫的免疫平衡和激素的分泌得到有效地改善。