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[目的]前期实验结果表明HMGA2在肾癌组织中高表达,且与TNM分期和淋巴结转移密切相关,可作为肾癌的一个诊断指标及判断肾癌患者预后的一个重要指标。除此之外,在肾癌细胞系中,HMGA2表达下调可明显抑制肾癌细胞的增殖及侵袭能力,促进肾癌细胞凋亡的发生,抑制肾癌的发生和发展。然而在体内条件下HMGA2对肾癌作用的影响仍然未知,因此本实验通过动物实验观察探讨HMGA2对人肾癌ACHN细胞成瘤的影响,为体内研究肾癌发病机制及靶向治疗提供依据。[方法]1、培养肾癌ACHN细胞,通过慢病毒载体LV-HMGA2-shRNA转染ACHN细胞建立并培养HMGA2基因沉默稳转细胞株。2、将SPF级BABLc/裸鼠随机分为3组,每组4只,分别为:ACHN组,ACHN-NC组,ACHN-siRNA组。适应性喂养一周后,分别于裸鼠右侧腋窝皮下注射未经处理的ACHN细胞,空白病毒载体LV-CN转染的ACHN细胞和慢病毒载体LV-HMGA2-shRNA转染的ACHN细胞,注射计量为4×10~6个细胞/只。注射后,隔天测量一次肿瘤体积直至实验结束脱臼处死小鼠,建立裸鼠移植瘤模型。3、移植瘤观察及测量:取瘤块称重比较各组之间成瘤体积和重量、成瘤时间是否有差异。4、取各组肿瘤组织采用qRT-PCR和Western blot法检测三组组织中E-cadherin、N-cadherin和snailmRNA和蛋白的表达情况。[结果]1、选择HMGA2三个不同的基因片段分别为HMGA2-siRNA1、HMGA2-siRNA2、HMGA2-siRNA3干扰ACHN细胞后,HMGA2-siRNA各组与空白病毒载体LV-NC组及未转染组细胞相比HMGA2mRNA的相对表达量均上调,差异具有统计学意义(F=186.3,P<0.001),除此之外,WB结果显示HMGA2-siRNA干扰后HMGA2蛋白表达下调,证实HMGA2-siRNA能干扰ACHN细胞HMGA2基因的表达和蛋白合成。2、ACHN-siRNA组与ACHN组和ACHN-NC组相比成瘤体积和重量明显降低,成瘤时间明显延长,差异具有统计学意义(F=234.1,P<0.001)。3、HMGA2表达下调后上皮标志物蛋白E-cadherin表达增高(F=248.1,P<0.001),N-cadherin表达下调(F=60.61,P<0.001),EMT相关转录因子Snail表达下调(F=65.12,P<0.001),差异具有统计学意义。4、HMGA2表达下调后E-cadherin mRNA水平增高(F=418.0,P<0.001),N-cadherin mRNA水平下调(F=551.0,P<0.001),EMT相关转录因子Snail mRNA水平下调(F=155.2,P<0.001),差异具有统计学意义。[结论]1、用HMGA2-siRNA干扰ACHN细胞,能达到沉默HMGA2基因的目的,且特异性良好。2、HMGA2能够促进肾癌细胞EMT的发生,参与肾癌的发生发展。3、HMGA2是Snail蛋白上游重要的核转录因子,TGF-β信号通路是促进Snail生成与维持的主要信号通路,提示HMGA2发挥生物学功能的机制与TGF-β信号通路有关。