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[目 的]本实验通过线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO模型),然后进行缺血再灌注、缺血后适应处理,检测脑缺血半暗带中LC3-Ⅱ、Beclinl以及自噬相关基因Atg5和Atg7的表达,同时检测脑缺血半暗带中lncRNA LOC102550394、lncRNA LOC100363521、lncRNA Cistr-act、lncRNA cb707485、lncRNARGD1564482的表达,研究脑缺血后适应脑保护机制中细胞自噬与相关lncRNA之间的可能相互作用。[方 法]1.线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO模型),分组进行缺血再灌注、缺血后适应处理,随后进行大鼠改良mNSS神经功能评分、新鲜全脑标本TTC染色测定脑梗死体积。2.Western Blot检测脑缺血半暗带中LC3-II、Beclin1的蛋白表达水平;Q-PCR检测其LC3-II、Beclin1的mRNA表达水平;免疫组织化学方法检测脑缺血半暗带中Atg5及Atg7的表达水平。研究不同梗死时长,缺血再灌注、缺血后适应处理调节细胞自噬水平参与大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。3.Q-PCR 检测脑缺血半暗带中 lncRNA LOCl 02550394、lncRNA LOC100363521、lncRNA Cistr-act、lncRNA cb707485、lncRNA RGD1564482 的表达水平。研究不同梗死时长,缺血再灌注、缺血后适应处理后脑组织中这5条lncRNA的表达情况,寻找细胞自噬与lncRNA之间可能的相互作用关系,进一步探索缺血后适应发挥神经保护作用的机制。[结 果]1.成功建立雄性SD大鼠MCAO模型:入组大鼠均出现栓塞对侧肢体偏瘫,入组条件为大鼠改良神经功能缺损评分(mNSS评分)7-12分,且经TTC染色证实大鼠右侧由大脑中动脉供血区域的脑组织为白色而正常脑组织为红色。MCAO模型大鼠死亡率高(31.25%),其中脑梗死6h组大鼠死亡率大于90%。2.mNSS评分结果显示:IPostC2h组大鼠较I/R2h组大鼠脑梗死后神经功能缺损评分降低、症状改善(P<0.05,差异有统计学意义);IPostC4.5h组大鼠较I/R4.5h组大鼠脑梗死后神经功能缺损评分降低、症状改善(P<0.05,差异有统计学意义);I/R4.5h组大鼠较I/R2h组大鼠脑梗死后神经功能缺损评分增高、症状加重(P<0.05,差异有统计学意义);IPostC4.5h组大鼠较IPostC2h组大鼠脑梗死后神经功能缺损评分增高、症状加重(P<0.05,差异有统计学意义)。3.TTC染色结果显示:IPostC2h组大鼠脑组织梗死体积小于I/R2h组(P<0.05,差异有统计学意义);IPostC4.5h组大鼠脑组织梗死体积小于I/1R4.5h组(P<0.05,差异有统计学意义);I/R4.5h组大鼠脑组织梗死体积大于I/R2h组(P<0.05,差异有统计学意义);IPostC4.5h组大鼠脑组织梗死体积大于IPostC2h组(P<0.05,差异有统计学意义)。4.Western Blot检测结果显示:IPostC2h组较I/R2h组大鼠脑缺血半暗带中的LC3-II、Beclin1蛋白表达水平低,且差异有统计学意义(P<0.05);IPostC4.5h组较I/R4.5h组大鼠脑缺血半暗带中的LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达水平低.,且差异有统计学意义(P<0.05);I/R4.5h组较I/R2h组大鼠脑缺血半暗带中的LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达水平高,且差异有统计学意义(P<0.05);IPostC4.5h组较IPostC2h组大鼠脑缺血半暗带中的LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达水平高,且差异有统计学意义(P<0.05)。5.Q-PCR检测结果显示:IPostC2h组较Ⅰ/R2h组大鼠脑缺血半暗带中的LC3-ⅡmRNA、Beclin1 mRNA水平低,且差异有统计学意义(P<0.05);IPostC4.5h组较I/R4.5h组大鼠脑缺血半暗带中的LC3-Ⅱ mRNA、Beclin1 mRNA水平低,且差异有统计学意义(P<0.05);I/R4.5h组较I/R2h组大鼠脑缺血半暗带中的LC3-ⅡmRNA、Beclin1 mRNA水平高,且差异有统计学意义(P<0.05);IPostC4.5h组较IPostC2h组大鼠脑缺血半暗带中的LC3-Ⅱ mRNA、Beclin1 mRNA水平高,且差异有统计学意义(P<0.05)。检测所筛选的5条lncRNA,结果IncRNA LOC102550394未被检测出。其中IPostC2h组较I/R2h组大鼠脑缺血半暗带中lncRNA LOC100363521、lncRNA Cistr-act、lncRNA RGD1564482 和 lncRNA cb707485的表达水平高,但前3条lncRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05),而lncRNA cb707485的表达差异无统计学意义(P>0.05);IPostC4 5h组较I/R4.5h组大鼠脑缺血半暗带中 lncRNA LOC100363521、lncRNA Cistr-act、lncRNA RGD1564482 和 lncRNA cb707485 的表达水平高,但仅 lncRNA LOC100363521的表达差异有统计学意义(P<0.05),余3条lncRNA的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。IPostC4.5h 组较 IPostC2h组 lncRNALOC100363521 的表达水平低,且差异有统计学意义(P<0.05)。6.免疫组化检测结果显示:IPostC2h组大鼠脑缺血半暗带中的自噬相关基因Atg5、Atg7表达水平较I/R2h组低,且差异有统计学意义(P<0.05);IPostC4.5h组大鼠脑缺血半暗带中的Atg5、Atg7表达水平较I/R4.5h组低,且差异有统计学意义(P<0.05);I/R4.5h组大鼠脑缺血半暗带中的自噬相关基因Atg5、Atg7表达水平较I/R2h组高,且差异有统计学意义(P<0.05);IPostC4.5h组大鼠脑缺血半暗带中的Atg5、Atg7表达水平较IPostC2h组高,且差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]1.缺血后适应对于大鼠局灶性脑缺血缺氧具有保护作用,在血流恢复再灌注时,可以有效降低再灌注损伤,减小脑梗死体积,同时改善脑梗死后大鼠的神经功能缺损症状。2.随着缺血时间的延长,大鼠脑梗死体积明显增大,mNSS评分明显升高,神经功能缺损症状明显加重,大鼠死亡率也随之升高。3.缺血后适应通过下调自噬相关基因Atg5和Atg7的表达,降低细胞自噬水平(通过检测LC3-II和Beclin1的表达水平得到证实),在脑的缺血再灌注损伤中提供保护效应。4.缺血后适应可能通过上调 lncRNA LOC100363521、lncRNA Cistr-act、lncRNA cb707485、lncRNARGD1564482等的表达以降低细胞自噬水平从而发挥神经保护作用,但具体的分子通路还有待进一步研究。5.随着脑梗死时间的延长,缺血后适应的上述保护作用是相对减弱的。即lncRNA调节细胞自噬水平是在脑梗死早期发挥神经保护作用。