【摘 要】
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研究了从洋刀豆豆子中同时提取ConA和Urease的工艺.根据ConA和Urease两者溶解共性,通过单因素实验,确定了提取剂为:0.02mol/l pH7.2磷酸缓冲液,含NaCl浓度为0.10mol/l.通过响
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研究了从洋刀豆豆子中同时提取ConA和Urease的工艺.根据ConA和Urease两者溶解共性,通过单因素实验,确定了提取剂为:0.02mol/l pH7.2磷酸缓冲液,含NaCl浓度为0.10mol/l.通过响应面分析,确定了一次最佳提取工艺条件为:原料粉碎度60-80目,搅拌转速100rpm,提取液料比为9:1,提取时间1.5小时,提取温度25℃.通过单因素确定了二次最佳提取工艺为:搅拌转速100rpm,提取液料比为5:1,提取时间1.5小时,提取温度25℃.提取液成分分析,显示其蛋白质浓度为18.82mg/ml,ConA活力为2616.32HU/ml,比活为139.02HU/mg;Urease活力为324.91U/ml,比活为17.26U/mg.ConA提取得率为90.72﹪,Urease提取得率为93.05﹪.研究了采用Sephadex G-50亲和层析技术对洋刀豆豆子提取液中ConA和Urease分离和ConA纯化.通过对提取液微滤预处理,料液的澄清度得到明显的提高,但ConA和Urease的活性分别损失6.20﹪和9.50﹪,蛋白质损失为5.21﹪,预处理后提取液,经过Sephadex G-50亲和层析柱,可使提取液中ConA和Urease得到完全分离.ConA经Sephadex G-50亲和层析后比活提高66.13倍,比活达6976.83HU/mg,得率为80.68﹪.该文还对洋刀豆豆子中ConA的灭活进行了初步探索,结果表明,干热处理不能使洋刀豆豆粉中的ConA活力明显丧失,采用95℃/40min,100℃/30min或105℃/10min的湿热处理,可使ConA的活力完全丧失,在pH8.5-13.0范围内,采用一定pH值的稀碱溶液浸提洋刀豆豆粉中的蛋白质,可使其中的ConA活力显著丧失,当洋刀豆豆子蛋白质溶液中添加茶多酚浓度达17.5mg/ml时,也可完全灭活ConA的活力.
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