衰老大鼠血管和心肌细胞骨架的改变及人参三七川芎提取物的干预作用

来源 :中国中医科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:greenranqingiqng
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人口老龄化是当今世界的发展趋势。随着年龄的增长,机体各组织器官的结构发生改变,功能逐渐下降,健康状况随之恶化。其中血管随年龄增长而发生的退行性病变称为血管老化。有研究表明,血管老化是老年人患心血管疾病的一个危险因素,因此进行血管老化的相关研究对于防治心血管疾病具有重要意义。细胞骨架是真核细胞中的动态蛋白网络体系,参与细胞的多种功能。细胞骨架的完整性和稳定性对于维持血管和心肌的形态必不可少,其结构的改变势必会影响血管和心肌的功能。本实验通过构建自然衰老大鼠模型并进行相关研究,旨在进一步探讨衰老过程中血管和心肌细胞骨架的改变,以及益气活血中药的干预作用,为中药延缓衰老提供新的依据。本研究分为两部分:文献综述和实验研究。1、文献综述:以细胞骨架为切入点归纳了血管老化过程中细胞骨架的相关改变,以及益气活血法延缓衰老及血管老化的研究现状,印证了细胞骨架的改变会影响血管的结构和功能,进而出现相应的血管病变。2、实验研究:目的:观察衰老过程中颈动脉和心脏形态和细胞骨架的改变,进一步探讨血管老化的机制和益气活血中药人参三七川芎提取物的干预作用。方法:建立自然衰老大鼠模型,分为衰老模型组、人参三七川芎醇提取物低、中、高剂量组和白藜芦醇组,另设青年对照组。中药高、中、低剂量组浸膏剂量分别为2.32g/kg/d、1.16g/kg/d、0.58g/kg/d,白藜芦醇组剂量为0.05g/kg/d,衰老模型组和青年对照组给予相应体积的蒸馏水。灌胃给药,每日1次,干预3个月。进行旷场实验,观察老年大鼠在行为学方面的改变。取材,测定胸腺和脾脏系数;γ-gal染色确定颈动脉和心脏衰老的程度;HE染色观察颈动脉和心脏的形态;Masson染色观察颈动脉胶原纤维的分布情况;检测血清ROS, MMP-2, MMP-9含量;分别用免疫荧光和免疫组化法观察颈动脉和心肌骨架蛋白α-tubulin, β-tubulin和F-actin的改变;用Western-blot检测颈动脉、心肌α-tubulin, β-tubulin, F-actin, HSP27的蛋白表达情况。结果:与青年组相比,衰老大鼠毛发蓬松枯槁、无光泽,易脱落,色发黄,行动迟缓,精神萎靡;跨格总数均减少(P<0.01),总行径距离减少(P<0.05)。胸腺系数和脾脏系数下降(均P<0.01);颈动脉和心脏β-gal阳性表达区域增多;光镜下可见大鼠颈动脉血管壁增厚,内膜不光滑且内皮细胞排列紊乱,平滑肌细胞排列紊乱,弹力膜扭曲、断裂、结构不完整,外膜结缔组织增生明显。血管壁胶原面积比值增大(P<0.01);衰老大鼠心肌增厚,肌纤维排列紊乱,甚至出现心肌纤维溶解断裂现象;衰老模型组血清ROS、MMP-2、MMP-9含量增高(P<0.05);颈动脉和心肌组织中α-butulin、β-tubulin、F-actin平均荧光强度和平均光密度值分别增加(P<0.01);α-tubulin, β-tubulin, F-actin蛋白相对表达值增加(P<0.01),HSP27蛋白相对表达值减小(P<0.01)。与衰老模型组相比,人参三七川芎提取物和白藜芦醇可以改善衰老大鼠的一般状态;增加衰老大鼠的跨格总数和总行径距离(P<0.05);中药中、高剂量组和白藜芦醇组可以增高大鼠的胸腺系数(均P<0.05),中药高剂量组和白藜芦醇组可以增高大鼠的脾脏系数(P<0.01);降低颈动脉和心脏β-gal阳性表达区域,改善颈动脉和心脏重构现象,降低血管壁胶原面积比值(P<0.05),降低血清ROS. MMP-2含量(P<0.05);中药中、高剂量组和白藜芦醇组血清的MMP-9降低(P<0.05);中药各剂量组和白藜芦醇组的颈动脉和心肌中α-butulin、β-tubulin、F-actin平均荧光强度和平均光密度值分别减少(P<0.05); α-tubulin、β-tubulin、F-actin蛋白表达相对值减少(P<0.05), HSP27蛋白表达相对值增加(P<0.01)。结论:1、随着增龄,大鼠在行为学、免疫功能、氧化应激和细胞外基质等方面发生改变,表现为跨格总数和行径总距离的减少,胸腺系数和脾脏系数的下降,血清ROS和基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9含量增高。2、随着增龄,大鼠颈动脉和心脏发生形态的改变,表现为血管壁增厚,心肌细胞肥大等血管和心肌重构现象,此外,血管壁胶原分布面积增加。3、随着增龄,大鼠颈动脉和心脏的细胞骨架蛋白发生改变,表现为α-butulin、β-tubulin、F-actin含量升高,上游调控蛋白HSP27含量降低。4、人参三七川芎提取物和白藜芦醇能够提高衰老大鼠的行为学能力和免疫功能,改善血管和心肌重构现象,降低机体氧化应激和基质金属蛋白酶水平。益气活血中药和白藜芦醇可能通过HSP27下调F-actin含量,逆转细胞骨架成分的改变,进而影响血管和心肌细胞骨架的功能,延缓血管衰老。
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