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背景与目的：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,给女性的身心健康带来了极大的危害。现代乳腺癌治疗的主要手段为手术切除辅以化学药物治疗、内分泌治疗及放射治疗等综合治疗。虽然这些治疗手段大大改善了乳腺癌患者的预后,但治疗抵抗成为乳腺癌治疗中的严重障碍,其中乳腺癌细胞对化疗药物的耐药使得肿瘤易复发而难以彻底治愈。近年来提出的肿瘤干细胞学说认为,肿瘤干细胞保留了正常干细胞的自我复制和多向分化的潜能,在肿瘤的发生、发展、侵袭、转移、耐药性及复发等过程中发挥重要作用,乳腺癌肿瘤干细胞与化疗耐药等方面的关系成为研究的热点。Bmi-1基因是多梳基因家族中的重要成员,具有转录抑制、维持干细胞自我更新的作用,Bmi-1可能为乳腺癌肿瘤干细胞的标志物。国内外时有报道Bmi-1在包括乳腺癌在内的多种恶性肿瘤中高水平表达,但少见乳腺癌细胞中Bmi-1与乳腺癌肿瘤干细胞及耐药性关系相关报道；Sca-1和Oct-4基因在维持干细胞的活性和生物学特性中发挥重要作用,并与肿瘤干/祖细胞相关,本实验中将其选取为乳腺癌细胞系MDA-MB-468中肿瘤干细胞的标志。本研究应用了RT-PCR和Western blot技术半定量检测了乳腺癌常用化疗药物之一5-FU持续干预下Bmi-1和干细胞因子Sca-1和Oct-4在人乳腺癌细胞系MDA-MB-468中的表达情况,以探讨Bmi-1表达与乳腺癌肿瘤干细胞、乳腺癌化疗耐药之间的关系,以加深对乳腺恶性肿瘤耐药性和治疗后复发等生物学行为机制的理解,发现新的乳腺癌治疗分子靶点和提高化疗疗效。材料与方法：1.采用MTT法进行检测不同浓度(0.01μg/mL、0.1μg/mL、10μg/mL)的5-FU对人乳腺癌细胞MDA-MB-468的48h、72h增殖抑制情况,绘制细胞增殖抑制曲线,筛选合适的实验药物浓度。2.使用筛选出的合适浓度的5-FU持续干预人乳腺癌细胞MDA-MB-468连续传代,收集细胞；加药组为实验组,同时设置未加药对照组,连续传代培养,收集细胞。3.采用RT-PCR技术和Western blot技术分别检测对照组及5-FU干预实验组的每一代细胞之Bmi-1及干细胞相关因子Sca-1、Oct-4的mRNA和蛋白的表达情况。4.采用SPSS16.0进行统计学分析。Bmi-1、Sca-1及Oct-4不同代细胞间mRNA、蛋白表达水平比较采用单因素方差分析；而三指标间关系则采用Pearson相关性分析。检验水准α=0.05。结果：1.经MTT实验检测显示5-FU明显抑制人乳腺癌细胞系MDA-MB-468的增殖,选取5-FU最适宜实验浓度为0.1μg/mLo2. RT-PCR检测显示,在对照组中人乳腺癌细胞系MDA-MB-468不同代细胞间Bmi-1及Sea-1、Oct-4的mRNA表达相对值差异无统计学意义(均P>0.05)；实验组中,在0.1μg/mL的5-FU持续干预人乳腺癌细胞系MDA-MB-468过程中,不同代细胞间Bmi-1及Sca-1、Oct-4的mRNA表达相对值差异具有统计学意义(均P<0.05),并表现出以下变化趋势：先降低(第1代)-后升高(第2代)-继续升高(第3代)-再降低(第4代)-再升高(第5代)-降低(第6代)。3. Western blot检测结果显示,在对照组中人乳腺癌细胞系MDA-MB-468不同代细胞间Bmi-1及Sca-1、Oct-4的蛋白表达相对值差异无统计学意义(均P>0.05)；在实验组中,在0.1μg/mL的5-FU持续干预人乳腺癌细胞系MDA-MB-468过程中,不同代细胞间Bmi-1及Sca-1、Oct-4的蛋白表达相对值差异具有统计学意义(均P<0.05),并表现出以下与上述mRNA变化相似的趋势：先降低(第1代)-后升高(第2代)-继续升高(第3代)-再降低(第4代)-再升高(第5代)-降低(第6代)。4.Bmi-1与干细胞因子Sca-1、Oct-4的mRNA和蛋白表达水平均呈显著正相关(r值接近1,均P<0.01)。结论：1.Bmi-1表达与干细胞因子Sca-1、Oct-4表达水平均呈显著正相关,提示Bmi-1基因可能为新的乳腺癌肿瘤干细胞标志物。2.化疗药物5-FU可影响乳腺癌细胞系MDA-MB-468中Bmi-1表达水平及肿瘤干细胞比例,提示Bmi-1基因可能与乳腺癌化疗耐药及复发有关。