论文部分内容阅读
溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种慢性、复发性的非特异性炎症性疾病。以腹痛、腹泻、粘液脓血便为主要临床表现。近年来,我国UC的发病率逐渐上升,严重影响了病人的生活质量,增加了经济负担,且存在癌变的风险。目前,UC的病因及其发病机制尚不明确,氧化应激(oxidative stress,OS)与线粒体功能紊乱可能在UC患者的发病过程中起到一定作用。自Lemasters于2005年提出线粒体自噬概念以来,很多研究证明其与多种疾病有关,如帕金森病、特发性肺纤维化等。目前线粒体自噬研究较多的是PINK1/Parkin。正常情况下,PINK1定位于线粒体,在线粒体外膜转位蛋白(translocase of the outer mitochondrial membrane,TOM)复合物及线粒体内膜转位蛋白(translocase of the inner mitochondrial membrane,TIM)复合物的作用下进入线粒体内膜inner mitochondrial membrane,IMM),被线粒体蛋白酶降解。线粒体作为氧化应激的主要影响成分之一,在氧化应激下导致线粒体受损发生去极化,使PINK在线粒体内的降解受阻,从而聚集于线粒体外膜(outermitochondrial membrane,OMM),进一步磷酸化Parkin使其募集于OMM,启动线粒体自噬。线粒体自噬不但可以清除受损的线粒体,维持线粒体的动态平衡,而且可以减少受损线粒体产生的过量线粒体反应活性氧类(mitochondrial reactive oxygen species),减轻细胞损伤。自噬被认为是一种保护机制对抗UC的炎症损伤。线粒体自噬也被认为与炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)有关。目前尚无PINK1/Parkin调节的线粒体自噬在UC中作用的研究。目的:检测UC患者结肠粘膜是否发生线粒体自噬,线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin的表达情况及其是否与UC严重程度有关。方法:1收集确诊为UC活动期患者33例作为实验组,并按照改良Mayo评分将其分为轻、中、重三组,每组各11例。结肠息肉患者11例作为对照组。2经结肠镜下取直-乙交界处结肠黏膜4块,采用HE染色显微镜下观察结肠粘膜组织病理学表现,透射电镜观察结肠粘膜线粒体自噬情况,免疫组化及Western blot方法检测结肠粘膜PINK1、Parkin蛋白的表达情况。应用SPSS13.0采用方差分析对数据进行统计学分析。结果:1 HE染色结果对照组结肠黏膜上皮结构完整,腺体细胞排列整齐,杯状细胞较多,可见少量炎性细胞浸润;UC各组黏膜可见大量炎性细胞浸润,隐窝结构紊乱,腺体变形、排列紊乱、数目减少,另外隐窝内及隐窝上皮均可见大量中性粒细胞浸润,伴杯状细胞减少,可出现黏膜上皮脱落或缺失。2透射电镜技术UC病人结肠粘膜组织均可发现线粒体的破坏,如线粒体肿胀,脊紊乱、水肿、消失,并可发现线粒体自噬现象,而对照组结肠粘膜组织线粒体形态结构正常,未观察到线粒体自噬。3免疫组织化学染色显示结肠粘膜组织中PINK1、Parkin的表达对照组结肠粘膜中PINK1和Parkin在胞质中呈棕黄色表达,而UC组胞质内呈深棕色表达,且表达量较对照组增加,统计学分析PINK1表达的积分光密度值(integrated optical density,IOD)为轻度(92372±17550)>中度(71405±1922)>重度(54203±3574)>对照组(31944±25323),任意两组比较P<0.05,差别有统计学意义;统计学分析Parkin表达的IOD值为轻度(58435±1114)>中度(42160±7798)>重度(24262±1140)>对照组(16274±2463),任意两组比较差别有统计学意义(P<0.05)。4 Western blot显示结肠黏膜组织中PINK1、Parkin的表达UC组与对照组比较PINK1、Parkin表达均上调,PINK1表达统计学分析为轻度(0.3795±0.0108)>中度(0.3484±0.0104)>重度(0.3249±0.0180)>对照组(0.2832±0.0479),任意两组比较P<0.05,差别有统计学意义;Parkin表达统计学分析为轻度(0.3319±0.0039)>中度(0.2910±0.0132)>重度(0.2448±0.0381)>对照组(0.1906±0.0100),任意两组比较差别有统计学意义(P<0.05)。结论:1 UC患者线粒体形态结构破坏,且发生了线粒体自噬现象。2 UC患者结肠黏膜组织中线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin的表达增多,且随疾病的严重程度的增加而下降。PINK1/Parkin介导的线粒体自噬可能在UC的发生发展中起到一定作用,且其表达水平与UC的严重程度有关。