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皂苷是三七(Panaxnotoginseng)的主要活性成分,具有多方面的药理作用。目前还没有利用植物内生微生物对皂苷成分进行生物转化的报道。本文中选择了两种三七中的皂苷成分ginsenosideRg1和ginsenosideRh1,用分离到的三七内生微生物对其进行生物转化,对具有转化活性的内生微生物进行鉴定,并对转化产物进行分离纯化和结构鉴定,取得以下结果:
1.对三七进行内生微生物的分离,获得内生微生物共计136株,其中内生真菌38株,内生细菌97株,内生放线菌1株。其中从三七植株的根部分离到34株真菌,91株细菌,1株放线菌;从茎中分离到2株真菌,6株细菌;从叶中分离到2株真菌。
2.对从三七植株中分离得到的136株内生微生物进行生物转化筛选,获得对ginsenosideRg1或ginsenosideRh1有生物转化活性的菌株5株,它们是LRM1,PRE16,PRE6a,Z和ZN。其中LRM1和PRE16对ginsenosideRg1和ginsenosideRh1均有生物转化作用;Z和ZN对ginsenosideRg1有生物转化作用;PRE6a对ginsenosideRh1有生物转化作用。
3.经16SrDNA序列聚类分析,内生细菌LRM1鉴定为芽孢杆菌(Bacillussp.)。通过形态学并结合ITS序列分析,内生真菌PRE16鉴定为多节孢属真菌(Nodulisporiumsp.),Z鉴定为青霉属的真菌(Penicilliumsp.),ZN鉴定为齿环球盖菇(Strophariacoronilla),PRE6a鉴定为尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)。
4.扩大转化量,从这5个菌株对ginsenosideRg1和ginsenosideRh1的发酵产物中共分离得到9个转化产物。从菌株LRM1,PRE16和ZN中分离到转化产物M1Rg1,E1Rg1和ZN1,经鉴定这3个转化产物均为vina-ginsenosideR22;从菌株LRM1中分离到转化产物M1Rh1,经鉴定为3-O-β-D-glucopyranosyl-6-O-β-D-glucopyranosyl-20(S)-protopanaxatriol;从菌株PRE16中分离到转化产物E1Rh1,经鉴定为pseudo-ginsenosideRT4;从菌株Z中分离到转化产物Z1Rg1,经鉴定为ginsenosideRe。转化产物ZN2,E2-1和E2-2的结构正在鉴定中。鉴定的转化产物中,vina-ginsenosideR22,pseudo-ginsenosideRT4和3-O-β-D-glucopyranosyl-6-O-β-D-glucopyranosyl-20(S)-protopanaxatriol都未报道过从三七中分离到。