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目的:构建MCL1基因(myeloid cell leukemia-1)沉默表达载体,稳定转染含双微体(double minutes,DMs)的卵巢癌细胞系UACC-1598和不含双微体的卵巢癌细胞系SKOV3中,探讨MCL1基因在这两种卵巢癌细胞系中功能。
方法:利用pSuper siRNA(small interfering RNAs)基因沉默系统,在含双微体的人卵巢癌细胞系UACC-1598和不含双微体的人卵巢癌细胞系SKOV3中稳定沉默MCL1基因。在蛋白表达水平验证MCL1基因沉默效果后,利用MTT法检测细胞生长,流式细胞仪测定细胞周期及凋亡情况,软琼脂克隆和克隆形成实验测定细胞成瘤能力。
结果:MTT结果显示UACC-1598细胞中,MCL1基因沉默后细胞较对照组生长缓慢,SKOV3却无明显变化。流式结果显示UACC-1598中沉默目的基因后细胞周期较对照组无明显变化,凋亡率却存在显著差异,pSUPER-MCL1-860凋亡率为29.66±2.52%(P<0.01),pSUPER-MCL1-1235凋亡率为25.69±1.12%(P<0.05);而SKOV3中,沉默MCL1后细胞出现轻微的G1期阻滞。软琼脂克隆和克隆实验表明MCL1基因沉默后,SKOV3细胞成瘤能力收到明显抑制,而UACC-1598则不受影响。
结论:MCL1基因在UACC-1598中通过抗凋亡作用促进肿瘤细胞的生长。在SKOV3细胞中MCL1的过表达可以促进细胞的成瘤能力。