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Toll样受体(Toll-like receptors，TLRs)作为一种重要的模式识别受体(pattern-recognition receptors，PRRs)，能够特异性识别病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular pattems，PAMPs)，激发动物天然免疫和获得性免疫的早期免疫反应。TLR4(Toll-like receptor 4)是TLRs受体家族中的一员，属于Ⅰ型跨膜受体蛋白，由胞外区、跨膜段和胞内区三部分组成。它是机体对革兰氏阴性菌表达的LPS应答的主要受体，在LPS跨膜信号转导中发挥主导作用。TLR4特异性识别LPS，经MyD88依赖和MyD88非依赖两条信号途径转导，最终导致NF-κB的激活，引起各种炎症因子基因的表达。
目的：TLR4基因作为重要的免疫相关基因，其多态性与动物对病原的免疫力有着明显相关性。本实验主要研究苏钟猪TLR4基因的多态性及其编码区1027bp处突变对TLR4蛋白功能的影响。
方法：运用PCR-SSCP方法检测TLR4基因在苏钟猪中的多态性，探讨不同基因型在该群体中的分布规律；利用Real-timePCR方法检测编码区1027bp位点不同基因型(CC型和AC型)的猪肺泡巨噬细胞在LPS诱导后，TLR2，4及促炎症因子TNF-α，IL-1β基因表达量的差异，讨论该处突变对TLR4识别LPS造成的影响。
结果：
1本实验在TLR4基因编码区上共找到3个非同义SNP突变点：T611A、G962A和C1027A，均位于TLR4基因第三外显子，LRRs功能域上。这些非同义突变导致编码氨基酸的变化，其中611bp(Leu204His)和1027bp(Gln343Lys)两个突变导致氨基酸性质发生改变，电荷量增加。在整个群体中，只有1027bp位点为中度多态位点，其余各突变点均为低度多态。
2LPS能快速诱导猪肺泡巨噬细胞中TLR4表达，200ng/ml的LPS作用20min后，TLR4mRNA表达水平显著升高(P＜0.01)，48h内都维持在较高水平。LPS还能引起促炎症因子TNF-α和IL-1β表达量上调，但TNF-αmRNA表达量的升高先于IL-1p。
3TLR4基因编码区1027bp位点不同基因型(CC型和AC型)的猪肺泡巨噬细胞(PAMs)对LPS的敏感性及反应强度存在显著性差异。TLR4mRNA表达量在LPS刺激20min时即出现显著差异(P＜0.001)，直到12hCC组的TLR4表达水平都显著高于AC组；促炎症因子TNF-αmRNA的表达量的显著性差异出现在20min(P＜0.001)，而在相同时间内，CC型开始显著升高时(1h)，AC型该基因的表达水平已达到其5倍以上(P＜0.05)．而IL-1β表达量的差异出现较迟，12h后才出现显著差异(P＜0.05)，但差异持续时间较长，48h时AC组仍然显著高于CC组(P＜0.01)。
结论：
1苏钟猪TLR4基因编码区的序列相对保守、多态含量较低，群体遗传变异程度较小。
2TLR4基因编码区C1027A能影响TLR4识别LPS的能力。在LPS诱导过程中CC型猪肺泡巨噬细胞TLR4基因表达水平上调速度高于AC型，对LPS的敏感性高；而促炎症因子TNF-α，IL-1p的表达量低于AC型，炎症反应程度轻、时间较短。TLR4基因编码区1027bp处等位基因C可能为苏钟猪抗革兰阴性菌感染的优势基因。
目的：TLR4基因作为重要的免疫相关基因，其多态性与动物对病原的免疫力有着明显相关性。本实验主要研究苏钟猪TLR4基因的多态性及其编码区1027bp处突变对TLR4蛋白功能的影响。
方法：运用PCR-SSCP方法检测TLR4基因在苏钟猪中的多态性，探讨不同基因型在该群体中的分布规律；利用Real-timePCR方法检测编码区1027bp位点不同基因型(CC型和AC型)的猪肺泡巨噬细胞在LPS诱导后，TLR2，4及促炎症因子TNF-α，IL-1β基因表达量的差异，讨论该处突变对TLR4识别LPS造成的影响。
结果：
1本实验在TLR4基因编码区上共找到3个非同义SNP突变点：T611A、G962A和C1027A，均位于TLR4基因第三外显子，LRRs功能域上。这些非同义突变导致编码氨基酸的变化，其中611bp(Leu204His)和1027bp(Gln343Lys)两个突变导致氨基酸性质发生改变，电荷量增加。在整个群体中，只有1027bp位点为中度多态位点，其余各突变点均为低度多态。
2LPS能快速诱导猪肺泡巨噬细胞中TLR4表达，200ng/ml的LPS作用20min后，TLR4mRNA表达水平显著升高(P＜0.01)，48h内都维持在较高水平。LPS还能引起促炎症因子TNF-α和IL-1β表达量上调，但TNF-αmRNA表达量的升高先于IL-1p。
3TLR4基因编码区1027bp位点不同基因型(CC型和AC型)的猪肺泡巨噬细胞(PAMs)对LPS的敏感性及反应强度存在显著性差异。TLR4mRNA表达量在LPS刺激20min时即出现显著差异(P＜0.001)，直到12hCC组的TLR4表达水平都显著高于AC组；促炎症因子TNF-αmRNA的表达量的显著性差异出现在20min(P＜0.001)，而在相同时间内，CC型开始显著升高时(1h)，AC型该基因的表达水平已达到其5倍以上(P＜0.05)．而IL-1β表达量的差异出现较迟，12h后才出现显著差异(P＜0.05)，但差异持续时间较长，48h时AC组仍然显著高于CC组(P＜0.01)。
结论：
1苏钟猪TLR4基因编码区的序列相对保守、多态含量较低，群体遗传变异程度较小。
2TLR4基因编码区C1027A能影响TLR4识别LPS的能力。在LPS诱导过程中CC型猪肺泡巨噬细胞TLR4基因表达水平上调速度高于AC型，对LPS的敏感性高；而促炎症因子TNF-α，IL-1p的表达量低于AC型，炎症反应程度轻、时间较短。TLR4基因编码区1027bp处等位基因C可能为苏钟猪抗革兰阴性菌感染的优势基因。