重楼总皂苷提取工艺及抗氧化特性

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重楼为百合科植物滇重楼(Pris polyphylla Smith var. yunnanensis)和七叶一枝花(Pris polyphylla Smith var.Chniensis)的干燥根茎。具有消肿止血、清热解毒、凉肝定惊的功效,在传统医学上主要用于各种疮毒、蛇毒、痈疽,现代药理研究表明其具有抗癌、抗生育、抗微生物、镇静、镇痛、止咳平喘、止血等作用。主要药效成分是甾体皂苷类化合物。测定重楼总皂苷对评价重楼药材的质量具有重要的意义。重楼中总皂苷的提取一般采用有机溶剂法,常采用甲醇和乙醇作为溶剂,但提取过程中产物效率较低。纤维素酶可以破坏植物细胞壁,使萃取时细胞内的物质更多暴露出来,在天然产物开发领域得到广泛应用。本研究提出以重楼粉末为原料,采用酶辅助提取后用有机溶剂萃取的方法提取重楼总皂苷,在国内外还未见报道。同时,通过Box-Behnken试验设计,利用design-expert设计分析软件对主要影响因素进行了响应面分析,建立酶法处理工艺数学模型,探讨合理的工艺条件,并对重楼总皂苷体外抗氧化性进行了研究。具体内容如下:第一,建立了重楼总皂苷测定方法。结果表明:以薯蓣皂苷元为对照品,采用5%香草醛冰醋酸溶液与70%高氯酸比值为4:6,反应时间为25min,水浴温度为50℃,分光光度法测定重楼中总皂苷含量。最大吸收波长为457nm,在0.02mg~0.14mg范围内与吸光度线性关系良好,相关系数r=0.9991。稳定性试验RSD=0.65%;加样回收率为96.60%,RSD=3.41%。该方法的准确度、精密度和灵敏度均符合重楼总皂苷分析的要求。第二,为克服超声提取重楼总皂苷得率低的问题,采用超声辅助酶法提取新工艺。在单因素实验的基础上,利用Box-Behnken试验设计,考察酶用量、酶解温度、pH和酶解时间对重楼总皂苷提率的影响。通过此模型得到最佳工艺条件为:酶用量为32U/g底物,酶解温度为52℃,酶解pH为4.6,酶解时间为92min,在此条件下重楼总皂苷的提取率的理论值是1.68%,验证实测值为1.66%,与理论值的相对误差为1.12%。第三,体外抗氧化试验表明:重楼总皂苷对超氧阴离子自由基和羟基基自由基的清除能力较好,其中IC50分别在0.4mg/mL和0.6mg/mL左右,清除能力均高于VC。重楼总皂苷是一种较好的天然自由基清除剂。
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