【摘 要】
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目的:探究RUNX1对BMP9诱导间充质干细胞成骨分化的影响。方法:用Ad-BMP9腺病毒感染间充质干细胞,RT-PCR和Western Blot分别在mRNA和蛋白水平检测RUNX1的内源性表达。构建过表
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目的:探究RUNX1对BMP9诱导间充质干细胞成骨分化的影响。方法:用Ad-BMP9腺病毒感染间充质干细胞,RT-PCR和Western Blot分别在mRNA和蛋白水平检测RUNX1的内源性表达。构建过表达RUNX1(Ad-RUNX1)和干扰RUNX1(Ad-siRUNX1)的重组腺病毒,并在mRNA和蛋白水平验证Ad-RUNX1和Ad-siRUNX1的效果。用Ad-RUNX1或Ad-siRUNX1分别与BMP9条件培养基共处理间充质干细胞,碱性磷酸酶染色和活性测定检测成骨早期分化指标ALP,茜素红S染色检测成骨晚期分化指标钙盐沉积,RT-q PCR检测成骨相关转录因子RUNX2、DLX5、OSX、CollaI和成骨标志基因OCN在mRNA水平的变化,Western Blot检测RUNX2、DLX5和OCN在蛋白水的变化。最后用Ad-RUNX1、Ad-siRUNX1和Ad-BMP9处理MEFs细胞,检测经典的BMPs/Smad信号通路中Smad1/5/8和MAPK信号通路中p38和ERK1/2在总蛋白和磷酸化水平的变化。结果:Ad-BMP9可使RUNX1在mRNA和蛋白水平表达上调。构建的重组腺病毒Ad-RUNX1和Ad-siRUNX1能有效在mRNA和蛋白水平过表达或干扰间充质干细胞中RUNX1的表达。Ad-RUNX1和Ad-siRUNX1处理BMP9诱导的间充质干细胞后,Ad-RUNX1增强了BMP9诱导的ALP活性、钙盐沉积、成骨相关转录因子RUNX2、DLX5、OSX、CollaI和成骨标志基因OCN在mRNA水平的表达,RUNX2、DLX5和OCN蛋白水平的改变与mRNA水平一致。Ad-siRUNX1减弱了BMP9诱导的ALP活性、钙盐沉积、成骨相关转录因子RUNX2、DLX5、OSX、CollaI和成骨标志基因OCN在mRNA水平的表达,RUNX2、DLX5和OCN蛋白水平的改变与mRNA水平一致。用Ad-RUNX1、Ad-siRUNX1和Ad-BMP9处理MEFs细胞后,过表达RUNX1增强BMP9诱导的Smad1/5/8的磷酸化,干扰RUNX1抑制BMP9诱导的Smad1/5/8的磷酸化,总的Smad1/5/8不受RUNX1影响。RUNX1不影响BMP9诱导的p38和ERK1/2的磷酸化水平。结论:RUNX1可促进BMP9诱导的间充质干细胞成骨分化。
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