【摘 要】
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该论文对柑桔LFY同源基因开展了深入研究,主要实验结果如下:1.研究了一种可有效排除细胞内多酚类等杂质污染的简便、快捷、经济的果树基因组DNA提取方法;2.利用PCR技术从拟南
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该论文对柑桔LFY同源基因开展了深入研究,主要实验结果如下:1.研究了一种可有效排除细胞内多酚类等杂质污染的简便、快捷、经济的果树基因组DNA提取方法;2.利用PCR技术从拟南芥菜基因组DNA中扩增出一条长414bp的DNA自然.该片段被克隆到pBluescript SK(-)的EcoR Ⅴ位点上,序列分析结果证实扩增和克隆的DNA片段是花分生组织特征基因LFY 3端的部分片段,不含内含子序列;3.根据不同植物LFY同源基因3端序列高度保守性,设计合成简并引物,采用PCR技术从柑桔基因组DNA中分离出一条长883bp的柑桔LFY同源基因(csLFY)片段,该片段克隆到pGEM-1载体中.序列分析表明,所扩增的883bp DNA片段中包含一个长476bp的内含子,拼接位点与其他植物的LFY同源基因一致;4.为了分离柑桔csLFY和其它重要基因,该研究构建了一个柑桔基因组DNA文库;5.在从柑桔基因组DNA文中中筛选csLFY克隆的过程中,发展了一种原位杂交和PCR相结合的文库筛选方法;6.研究人员建立了一个广柑高效离体再生系统,为开展LFY基因对柑桔遗传转化研究奠定了基础;7.构建了35S:LEAFY:NOS-ter重组DNA,插入到植物双元表达载体pBINPLUS中,构建成LFY组成型表达载体pDC202.通过三亲杂交法将pDC202导入农杆菌菌株LBA4404.
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