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目的： 病毒性心肌炎（viral myocarditis，VMC）是指由许多不同的病毒感染引起心脏炎症和心肌损伤的疾病。大量研究表明Th细胞（help T cell，CD4+T细胞）亚群比例和分化异常与VMC的发生发展密切相关。而我们前期研究发现胆碱能抗炎通路（cholinergic anti-inflammatory pathway，CAP）可以减少病毒性心肌炎的Th1和Th17细胞相关炎症因子的表达。这些都启示我们CAP很有可能通过影响Th细胞分化来抑制VMC的炎症反应。本课题旨在研究CAP对VMC小鼠的Th细胞的影响，明确Th细胞分化对VMC小鼠生存率、炎症因子、心肌组织损伤和炎症浸润的作用。 方法： 细胞实验：30只雄性4-5周龄Balb/c小鼠（上海史莱克动物中心提供），腹腔接种100TCID50的柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus type3 Nancy株，CVB3)稀释液0.5ml，来制作VMC动物模型，接种的第7天，从存活的小鼠中随机选出10只小鼠安乐死，无菌取出脾脏，提取 Th细胞转入12孔板，随机将细胞分成3组：PBS组(PBS)，烟碱组（Nicotine）和甲基牛扁碱组(Methyllycaconitine，MLA)。烟碱组给予烟碱（100μmol/L） PBS溶液，甲基牛扁碱组给予甲基牛扁碱（100μmol/L）PBS溶液，PBS组给予等剂量的PBS。培养5天后使用流式细胞术分析各Th细胞亚群的比例，采用Western Blot法检测Th细胞相关炎症因子及转录因子的表达。动物实验：130只雄性4-5周龄Balb/c小鼠，根据前期预实验结果及小鼠死亡率情况，将小鼠随机分成4组：对照组（Control，n=10），病毒性心肌炎（VMC， n=40），烟碱组（Nicotine，n=40），甲基牛扁碱组（Methyllycaconitine，MLA， n=40）。其中烟碱组，VMC组和甲基牛扁碱组小鼠使用同种方式接种100TCID50的CVB3病毒稀释液0.5ml来制作VMC模型，对照组小鼠注射同等剂量的DMEM液,将病毒感染的第一天作为第0天。从第1天开始，烟碱组小鼠每天腹腔注射烟碱（0.4mg/kg，一天三次）生理盐水溶液，MLA组小鼠每天腹腔注射甲基牛扁碱（2.4mg/kg，每天一次）生理盐水溶液，对照组和VMC组小鼠每天腹腔注射等量的生理盐水，连续给药14天，观察各组的一般生长情况和死亡情况。于第7天和14天时在各组小鼠分别取出5只处死，制作病理切片，HE染色观察小鼠心肌损失和炎症浸润，q-PCR检测各组小鼠心肌中 CVB3病毒 RNA的丰度，Western Blot检测各组小鼠心肌组织促炎因子、Th细胞相关炎症因子和转录因子的表达，流式细胞术检测7天时小鼠脾脏Th细胞亚群比例。 结果： ①细胞实验结果：Th细胞亚群相关特异性转录因子的表达变化：与PBS组和甲基牛扁组相比，烟碱治疗降低了Th1和Th17细胞相关转录因子(T-bet、Ror-γ)，增加了Th2和Treg细胞相关转录因子（Gata3、Foxp3）（P＜0.05）；Th细胞亚群变化：烟碱组的Th1和Th17细胞比例升高，Th2和Treg细胞比例下降（P＜0.05）。②动物实验结果：小鼠生存率变化：对照组生存率为100％，烟碱组的生存率为60%（死亡16只），显著高于VMC组小鼠的生存率45%（死亡22只）和MLA组小鼠的生存率30%（死亡28只）(P＜0.05)；HE染色：7天和14天时，对照组小鼠心肌未发现心肌损伤和炎症浸润。与VMC组和MLA组相比，烟碱组小鼠的心肌损害和炎症浸润显著下降了(P＜0.05)；各组小鼠心肌中CVB3病毒 RNA丰度：第7天和14天时，在各实验组之间，心肌中CVB3病毒RNA没有明显差异；各组小鼠心肌中促炎因子的表达变化：在7天时，与VMC组和MLA组相比，烟碱治疗可以降低心肌中的TNF-α、IL-1β及IL-6表达（P＜0.05），然而在第14天时，各组之间的炎症因子表达量却没有差异；心肌中Th细胞各亚群相关的特异性炎症因子和转录因子表达变化：与病毒性心肌炎组和甲基牛扁碱组相比，烟碱治疗后，7天时小鼠心肌中T-bet、IFN-γ、ROR-γ和IL-17表达下调，但Gata3、IL-4和Foxp3表达量却上升了（P＜0.05）。14天时，T-bet、IFN-γ、ROR-γ、IL-17、Gata3、IL-4和Foxp3在烟碱组、VMC组和MLA组之间没有明显差异；脾脏中Th细胞亚群比例变化：7天时，与VMC组和MLA组相比，烟碱组的Th1细胞和Th17细胞比例明显降低，然而Th2细胞和Treg细胞比例却明显上升（均P＜0.05）。 结论： 验证了激活CAP对VMC鼠脾脏中Th细胞分化的调节作用。烟碱均能激活在体和离体脾脏 Th表面的α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7 nicotinic acetylcholine receptor，α7-nAChR），增加脾脏Th2和Treg细胞的比例，减少脾脏Th1和Th17细胞的比例，同时降低病毒感染后心肌间质浸润的淋巴细胞中Th1和Th17细胞的比例，升高Th2和Treg细胞的比例，进而下调心肌细胞中促炎因子的蛋白水平，降低心肌损伤和炎症细胞浸润，提高VMC小鼠的生存率。这些结果都表明激活CAP就可以调节脾脏CD4+T的分化，抑制病毒性心肌炎炎症反应。