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天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)是从栝楼根鲜汁中得到的一种蛋白质。我们将小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0细胞)与经TCS免疫过的小鼠脾细胞融合,融合后的细胞悬浮于HAT培养液中进行选择性培养,挑选可以分泌TCS单克隆抗体的细胞系,再经克隆化为单克隆细胞系。用间接酶联免疫吸附法检测此细胞系分泌单克隆抗体情况。经细胞融合和2次克隆化后,获得1株可以稳定分泌TCS单克隆抗体的杂交瘤细胞系,ELISA检测结果为阳性。此杂交瘤细胞系可以稳定分泌天花粉蛋白单克隆抗体,并在此基础上建立了TCS单克隆抗体检测方法,为TCS的鉴定提供了快速、便捷、准确的方法。 本文还研究了温度、PH值、培养时间、培养基成分、接种量、诱导剂浓度等6种因素对于天花粉蛋白基因工程菌株T239表达量的影响,优化了培养及表达条件,以达到提高产量的目的。发现此菌株在温度30℃、PH值7.3、摇床转速200r/min、50ml/500ml培养瓶、接种量3%、培养时间30h、添加葡萄糖浓度为2.0g/L时,表达量最高。 进一步我们对菌株T239表达获得的天花粉蛋白抗人免疫缺陷病毒的活性进行了研究。将人免疫缺陷病毒1型在细胞系中培养,加入表达获得的天花粉蛋白后,观察细胞病变情况,检测P24抗原及逆转录酶的活性。结果发现阴性对照组细胞在第7天以后均出现人免疫缺陷病毒1型感染典型细胞病变,P24抗原及逆转录酶检测均为阳性;阳性对照组始终未见HIV-1感染典型细胞病变,逆转录酶的活性检测和P24抗原检测结果均为阴性,说明实验设计合理。发现加入天花