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第一部分卵巢储备功能下降不孕症患者中医证候特点研究[目的]探讨行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）卵巢储备功能下降（DOR）不孕症患者中医证候特点及证型分布规律,并对患者临床妊娠率与证候的关系进行分析,以期为应用中医药辅助治疗提高IVF-ET患者妊娠结局提供辨证参考。[方法]收集2016年1月-2016年12月于安徽省立医院生殖中心行IVF-ET助孕的卵巢储备功能下降不孕患者,根据年龄分为3组:20-35岁、36-40岁和41-45岁。通过文献研究和专家咨询设计证候积分调查表,根据证候调查结果分析比较各组患者证候构成比及积分情况,并对DOR患者不同证候之间临床妊娠率进行比较分析。[结果]1、DOR不孕症患者不同年龄证候分布情况不同年龄DOR不孕患者中医证候分布显示肝郁证是最常见证候,常与其他证候复合出现,其中20-35岁与36岁以上患者比较,肾阴虚证、血瘀证和肾阳虚证所占比例的差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,肝郁证、脾虚证、痰湿证及其他所占比例的差异无统计学意义（P>0.05）。2、DOR患者不同年龄证候积分情况比较三组年龄段的中医证候积分对比结果显示:不同年龄之间肝郁证、肾阳虚证、脾虚证、痰湿证和其他证候积分之间的差异无统计学意义（P>0.05）;41岁以上与35岁以下的患者相比,肾阴虚证和血瘀证证候积分偏高,差异有统计学意义（P<0.05）。3、DOR患者不同年龄复合证候分布特点DOR患者以复合证候居多。分析比较不同年龄DOR患者复合证候间的构成比表明:肾虚肝郁、脾肾两虚和脾虚痰湿之间差异无统计学意义（P>0.05）,肾虚血瘀证、肝郁血瘀和肾虚肝郁血瘀证在20-35岁年龄段与41-45岁年龄段之间差异有统计学意义（P<0.05）。年龄越大肾虚血瘀和肝郁血瘀的比例越高。4、DOR患者不同证候临床妊娠率的比较统计结果表明35岁以下DOR患者临床妊娠率最高的是肝郁证,最低的是肾阴虚证。各证候之间差异无统计学意义。36岁以上DOR患者肾阴虚证和肾阳虚证IVF临床妊娠率较低,虚证妊娠率总体比实证低。肾阴虚证分别与其他证候比较,与血瘀证、肝郁证差异有统计学意义（P<0.05）,与肾阳虚证、脾虚证比较差异无统计学意义（P>0.05）。其他各证候两两比较差异无统计学意义（P>0.05）。[结论]1、肾虚证、肝郁证是DOR不孕患者最常见的证候且分布最为广泛,各证候发生比例由高到低依次为肝郁证、肾阴虚证、血瘀证、肾阳虚证、脾虚证、痰湿证。2、不同年龄DOR不孕患者中医证候分布均存在高比例的肝郁证。高龄DOR患者肾阴虚、血瘀和肾阳虚证候所占比例明显高于年轻DOR患者。3、DOR患者以复合证候多见,常见的复合证候有肾虚肝郁、肾虚血瘀、肝郁血瘀、肾虚肝郁血瘀、脾肾两虚、脾虚痰湿等。年轻DOR不孕患者以肾虚肝郁比例偏高,高龄DOR患者中医证型分布以肾虚血瘀和肾虚肝郁血瘀比例偏高。年龄越大肾虚血瘀和肾虚肝郁血瘀比例越高。4、小于35岁DOR患者不同证候IVF临床妊娠率差异不明显,但高龄DOR肾阴虚证临床妊娠率明显低于肝郁证、血瘀证。总体虚证临床妊娠率要低于实证。第二部分不同年龄DOR患者IVF妊娠结局及其机制研究[目的]探讨不同年龄DOR患者IVF妊娠结局差异,为临床DOR患者的预后判断提供依据。同时利用转录组测序技术（RNA-Seq）分析不同年龄段DOR患者卵巢颗粒细胞m RNA表达谱的变化,从基因水平探讨其机制。[方法]1、临床资料的回顾性分析回顾性分析2015年1月-2016年12月于安徽省立医院生殖中心行IVF微刺激方案助孕的DOR患者临床资料。根据年龄分为3组:A组（2035岁）100例;B组（3640岁）118例;C组（4145岁）222例,比较各年龄段组患者的体重指数、不孕年限、基础FSH、LH、E2水平、基础窦卵泡数（AFC）等基本情况和Gn用量、获卵数、优质胚胎数、胚胎种植率、临床妊娠率等情况。2、颗粒细胞的m RNA实验研究（1）收集10例年龄小于35岁且卵巢储备功能正常不孕症患者（a组作为对照组）和30例不同年龄段DOR患者（b组）卵巢颗粒细胞,其中DOR患者根据年龄分为三个年龄段（每个年龄段各10例）:b1:≤35岁;b2:36-40岁;b3:41-45岁。（2）提取各组患者颗粒细胞总RNA,制备m RNA c DNA文库,利用RNA-Seq测序技术和CPSS工具对总RNA进行深度测序和数据分析。（3）检测各组颗粒细胞m RNA表达谱,并比较分析差异表达的mRNA。（4）应用实时荧光定量PCR验证差异基因的表达水平。[结果]1、不同年龄DOR患者IVF妊娠结局比较不同年龄A、B、C三组患者的体重指数、不孕年限、基础FSH、LH、E2、基础窦卵泡数（AFC）等基本情况差异均无统计学差异（P>0.05）。促排后促排天数、Gn用量、获卵数、可用胚胎数、优质胚胎数、周期取消率等各组间的差异也无统计学意义（P>0.05）。A、B两组胚胎种植率、临床妊娠率、活产率略有差异,但没有统计学意义（P>0.05）。但与A、B两组比较,C组的胚胎种植率、临床妊娠率、活产率均有明显下降,而流产率明显升高,差异有统计学意义（P<0.01）。2、颗粒细胞mRNA实验研究利用转录组测序技术对各组颗粒细胞m RNA表达进行两两比较分析,筛选出表达上调的基因599个,表达下调的基因724个。a组分别与b1、b2、b3组比较筛选出3、188、284个差异表达基因。其中a VSb1、a VSb2和a VSb3（1VS2,1VS3,1VS4）共同表达差异的基因有1个。而b1VSb2、b1VSb3和b1VSb3（2V S3,2VS4,3VS4）共同表达差异基因有11个。主要包括表达下调的IGFBP5、I GFBP3、INHBB、SPARCL1、TNFSF10等,表达上调的HLA-DR5、SPRR2F。对差异表达基因RT-q PCR验证结果与测序结果一致。KEGG信号通路富集分析发现差异表达基因富集到Wnt信号通路、补体和凝血级联,吞噬小体,磷脂酶d信号通路,趋化因子信号通路,TGF-β信号通路,血小板激活,蛋白质的消化和吸收,细胞因子-细胞因子受体相互作用等通路上。[结论]1、DOR患者的胚胎种植率、临床妊娠率、活产率随年龄的增加而下降,流产率随着年龄的增加而增高。与高龄DOR不孕患者相比,年轻的DOR不孕患者还是有较好的临床妊娠结局的。2、卵巢功能正常不孕患者和DOR患者之间,不同年龄的DOR患者之间均存在多种差异表达的mRNA。IGF家族、INH等相关基因表达下调和HLA-DR5表达水平上调可能与DOR的发生发展相关。SPRR2F基因表达上调可能和DOR患者临床妊娠率低相关。高龄DOR患者SPARCL1、CITED1基因表达水平的下降和TNFSF10表达上调可能与年龄相关DOR患者IVF妊娠结局差异相关。这些差异表达的基因与细胞活化,免疫系统过程调节,免疫效应过程,应激反应、防御反应、生长因子结合,蛋白质复合物结合等有关。从而通过Wnt信号通路、TGF-β信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用等影响患者的卵巢储备功能,参与DOR的发生发展。