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[目的]人停滞缺陷免疫蛋白1(human Arrest Defective 1,hARD1)基因是一种酵母N-乙酰基转移酶(N-acetyltransferase,NAT)基因同源基因,其主要作用是通过与N-乙酰基转移酶1(N-acetytransferas 1,NAT1)基因结合,生成NatA复合体,并通过乙酰化作用影响蛋白质的功能、稳定性及蛋白质分子间的相互作用,进而在细胞周期的调控中发挥重要作用。本研究主要探讨hARD1基因乙酰化作用对大肠癌裸鼠移植瘤生长及凋亡相关因子表达的影响,进而为大肠癌的诊断和治疗提供新的理念,为大肠癌基因学研究提供新的分子生物学理论依据。[方法]1、将SW620人结肠癌细胞株复苏培养。2、将SW620细胞株分为5组,分别设空白对照组、hARD1过表达组(PCDNA3.1-hARD1过表达质粒)、过表达阴性对照组(空载PCDNA3.1质粒)、hARD1沉默组(hARD1基因特异性siRNA转染)、沉默阴性对照组(siRNA-Ncontrol转染);用荧光染色技术研究各组大肠癌细胞生长情况及形态学变化。3、取裸鼠25只随机分为5组,于裸鼠一侧腹侧皮下种植肿瘤细胞,并分组处理;精心培养裸鼠并观察肿瘤生长状况,记录肿瘤生长曲线。4、上述5组裸鼠成瘤后每3天测量瘤体,计算体积,3周后常规方法杀鼠取瘤,对肿瘤组织进行形态学观察,tunnel法检测肿瘤细胞凋亡情况,移植瘤细胞免疫组化分析凋亡途径因子表达情况。5、荧光定量PCR、Western bolt分别检测肿瘤组织细胞中hARD1、NAT1和细胞凋亡途径相关因子(TNF-α、caspase8、Apaf-1、caspase9、Bcl-2、Bad)的mRNA和蛋白质表达水平。[结果]1、SW620细胞株体外培养成功。2、5组裸鼠共25只生长良好,接种成功24只,成瘤率为96%,记录肿瘤生长曲线。结果:对5组裸鼠移植瘤体积进行单因素方差分析,并进行两两比较,结果提示hARD1表达对裸鼠移植瘤生长无明显影响(P>0.05)3、裸鼠移植瘤HE染色结果:5组移植瘤细胞形态未见明显差异,hARD1-siRNA组非癌细胞占比较高(非癌组织占比>50%),坏死组织较多,癌组织分布较分散,较其余各组癌组织占比较高(>50%)。4、tunel法检测肿瘤细胞凋亡结果:通过对tunel法检测凋亡阳性占比进行卡方检验,ARD1-siRNA组与CK组和NC-siRNA组差异有统计学意义(x2=4.985,P=0.026,P<0.05),CK组和NC-siRNA组差异无统计学意义(x2=0.232,P=0.63,P>0.05),结果提示人大肠癌SW620细胞株裸鼠移植瘤hARD1基因沉默后,其凋亡水平升高。5、裸鼠移植瘤免疫组化染色结果:裸鼠移植瘤细胞hARD1基因沉默时,siRNA组与CK组和NC-RNA组差异有统计学意义(x 2=6.349P=0.02,P<0.05),CK组和NC-RNA组差异无统计学意义,表明人大肠癌SW620裸鼠移植瘤细胞hARD 1基因沉默后,caspase8蛋白表达升高。6、荧光定量PCR检测结果:hARD1过表达组细胞凋亡途径相关因子(caspase9、TNFα)的mRNA表达水平较其阴性对照组和空白对照组明显下降,其余各组差异无统计学意义。7、Western bolt检测结果:hARD1过表达组细胞凋亡途径相关因子(caspase9、caspase8、TNFα、bad)的蛋白质表达水平较其阴性对照组和空白对照组明显下降,其余各组差异无统计学意义。[结论]1.hARD1基因过表达下调人大肠癌SW620裸鼠移植瘤细胞部分凋亡基因及凋亡途径因子表达,抑制肿瘤凋亡发生;2.hARD1基因沉默上调人大肠癌SW620裸鼠移植瘤细胞部分凋亡基因及凋亡途径因子表达,促进肿瘤凋亡发生。3.hARD1基因沉默,对人大肠癌SW620裸鼠移植瘤外观大小影响不确切,但促进裸鼠移植瘤凋亡水平。4.通过本实验研究得出:hARD1乙酰化作用通过对凋亡基因和凋亡途径相关因子表达影响,进而抑制凋亡促进肿瘤细胞生长。