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【目的】研究日本血吸虫22.6kDa(Sj22.6)抗原基因序列中是否存在免疫抑制性片段。【方法】依据已经报道的免疫抑制性序列的结构特征,从编码Sj22.6kDa抗原的基因序列中选取若干长度均为20～30bp的寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN),人工合成这些短的DNA序列,以目前国际上公认的对小鼠具有很强免疫刺激作用的ODN CpG1826作为刺激剂,用于后续实验,并设立对照。分离正常小鼠脾脏单个核细胞进行体外培养,将不同ODN分别与CpG 1826共同加入细胞培养体系,同位素~3H-TdR掺入法测淋巴细胞增殖实验观察各组细胞增殖水平的变化,以筛选出抑制性ODN并观察抑制性ODN作用的量效关系和时间效应关系。以刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)做刺激物,~3H-TdR掺入法测淋巴细胞增殖实验观察抑制性ODN对ConA诱导的细胞增殖的影响。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)观察抑制性ODN在体内和体外分别对CpG 1826引起的Th1型细胞因子IFN-γ和IL-12分泌的影响。采用流式细胞术检测抑制性ODN对细胞结合和摄取CpG 1826的影响。最后采用半定量PCR的方法检测抑制性ODN对CpG 1826的特异性受体Toll样受体9(TLR9)mRNA表达水平的影响。【结果】(1)淋巴细胞增殖试验结果显示,Sj22.6kDa抗原基因序列中的ODN F546和F311能抑制CpG 1826诱导的小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖,在各ODN终浓度均为1μM时,ODN F546和F311抑制率分别为87%和11%。(2)淋巴细胞增殖试验结果显示,当CpG 1826的量一定时,ODN F546和F311的抑制作用随着它们量的增多而增强。当与CpG 1826的摩尔比为1∶1时,ODN F546或F311的抑制作用在同时或先于CpG 1826加入时最强。(3)酶联免疫吸附实验结果显示,在体外和体内实验中,ODN F546均显著降低CpG 1826诱导的小鼠脾细胞产生的Th1型细胞因子IFN-γ和IL-12的分泌量。(4)流式细胞术检测结果表明,ODN F546使结合CpG 1826的细胞占总细胞的百分比由9.7%减少为4%(P＜0.05),使摄取CpG 1826的细胞占总细胞的百分比由36%减少为13%(P＜0.01)。(5)半定量RT-PCR结果显示,体外培养时,CpG 1826刺激后小鼠脾细胞TLR9mRNA大量表达,ODN F546显著降低CpG 1826引起的TLR9 mRNA表达(P＜0.01)。【结论】Sj22.6抗原基因序列中存在具有明显免疫抑制作用的ODNF546和F311,它们特异性抑制刺激性CpG诱导的淋巴细胞增殖,抑制作用呈现一定的剂量效应关系和时间效应关系。ODN F546能抑制刺激性CpG诱导的细胞因子IFN-γ和IL-12的分泌。减少细胞对刺激性CpG的结合及摄取、降低刺激性CpG特异性受体TLR9的基因表达可能与其作用机制相关。研究结果提示存在免疫抑制性ODN可能与编码Sj22.6kDa抗原的核酸疫苗不能诱导产生有效保护力有关。