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目的1.分析与稽留流产发病相关的临床资料和检查指标,为预防稽留流产的发生提供参考依据;2.探讨miRNAs与稽留流产发生的相关性;3.探索miR-3651对相关靶基因的调控作用。方法1.招募2016年12月-2017年12月在广西医科大学第一附属医院计划生育门诊、靖西市人民医院、德保县妇幼保健院妇科门诊就诊的121例稽留流产患者,作为病例组,另选取98例终止妊娠的孕妇为对照组,采用卡方检验或t检验比较稽留流产组和对照组的临床资料和检查指标。使用SPSS16.0进行统计分析。采用P<0.05作为统计显著性水平。2.选取病例组和对照组的绒毛组织各30例,釆用实时荧光定量PCR(real-time PCR)技术检测GEO芯片中筛选出的差异miRNA在两组绒毛组织中的表达,采用t检验比较两组中miRNA表达量的差异;对于有差异的miRNA,采用生物信息学方法筛选其相关靶基因。3.选取人绒毛膜滋养层细胞HTR-8作为细胞模型,采用瞬时转染技术使miR-3651过表达作为miR-3651 mimics组,miR-3651抑制表达作为miR-3651 inhibitor组,同时采用阴性对照组(NC)和空白对照组对实验条件进行控制。转染后的各组细胞提取其中的总RNA,采用RT-PCR检测各组RNA中miR-3651与预测靶基因的表达水平,并对各组的表达水平进行t检验,从而考查miR-3651对相关靶基因的调控作用。结果1.通过比较病例组与对照组临床资料发现:年龄≥35岁、BMI、人工流产史、死胎史、孕期生殖道感染这5个因素差异具有统计学意义(均P<0.05)。通过比较病例组与对照组临床检查指标发现:人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)、血小板比容(PCT)、血小板体积分布宽度(PDW)、纤维蛋白原(FIB)、凝血酶原活动度(PTA)这5个指标差异均有统计学意义(P<0.05)。2.采用实时荧光定量PCR技术验证GEO芯片中筛选出差异miRNAs在病例组和对照组的绒毛组织中的表达,结果显示:miR-3651,miR-4417在稽留流产组和正常对照组绒毛组织中均有表达;miR-3651在病例组绒毛组织中的相对表达量为1.19±0.52,在对照组中的相对表达量为0.86±0.46;miR-4417在病例组绒毛组织中的相对表达量为1.04±0.60,在对照组中的相对表达量为0.50±0.35;miR-3651和miR-4417在病例组的表达量明显高于对照组,经t检验,P<0.05,差异均有统计学意义;通过生物信息学方法预测出16个miR-3651的靶基因和8个miR-4417的靶基因。3.采用瞬时转染技术在人滋养细胞系HTR-8细胞中分别进行miR-3651过表达和抑制miR-3651表达,RT-PCR技术检测转染后各组细胞中miR-3651及SEC63、ATP6AP2 mRNA的表达量,结果显示:与阴性对照组相比,过表达组miR-3651的表达量升高;而SEC63、ATP6AP2 mRNA的表达量降低,差异均有统计学意义(P<0.05);抑制组miR-3651的表达量降低,而SEC63、ATP6AP2 mRNA的表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论1.稽留流产发病受多种因素影响,高龄妊娠、BMI≥24、多次人工流产、死胎史、孕期生殖道感染、激素水平异常、凝血功能异常等可能与稽留流产的发生有关。2.在稽留流产组绒毛组织中miRNA-3651、miRNA-4417的表达高于对照组,提示miRNA-3651、miRNA-4417可能与稽留流产的发生有关;3.miR-3651对靶基因SEC63、ATP6AP2具有调控作用,在mRNA水平上,miR-3651使SEC63、ATP6AP2的表达下调。