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蜘蛛抗逆能力强,分布广,能在各种环境中生活,因此,对于蜘蛛抗菌物质的研究不仅具有重要的理论意义,且具有广阔的应用前景。为了探讨蜘蛛是否具有昆虫及其他动物那样的体液免疫反应,以及经不同方法处理的角类肥蛛(Larinioides cornuta)血淋巴中抗菌物质的诱导表达规律及抗菌活性,从而深入探索生物的防御特性及其抗菌物质的产生机制,采用角类肥蛛为实验材料,经不同方法诱导其产生抗菌物质,并对抗菌物质的时序变化、抗菌活性、抗菌物质的性质及抗菌谱等进行了初步研究。研究结果如下:
1.经紫外线照射法、细菌注射法和饥饿法均能诱导角类肥蛛产生抗菌物质,对指示菌种均有明显的抑菌效果。三种方法相比,紫外线照射法诱导效果好,操作方便,为一种较好的抗菌物质诱导方法。
2.角类肥蛛经过诱导后,分别对0h、2h、4h、6h、8h、10h,12h、24h、36h、48h、60h等不同时间提取的血淋巴粗提液进行抗菌活性测定,发现诱导后角类肥蛛血淋巴粗提液对指示菌支气管败血博氏菌的抗菌活性迅速升高,在诱导后2h就能检测到抗菌活性,诱导后60h抗菌活性达到最大值,随后开始缓慢下降,并在一段时间内保持一定的水平,在诱导后120h仍能检测到抗菌活性。
3.室温下放置不同时间的血淋巴粗提液的抗菌活性没有显著差别,说明室温放置对其抗菌活性没有显著影响。反复冻融对角类肥蛛血淋巴粗提液的抗菌活性没有显著影响,说明抗菌物质的活性在多次冻融的情况下比较稳定。
4.角类肥蛛免疫血淋巴的稳定性实验表明,经过诱导的角类肥蛛血淋巴具有一定的热稳定性,80℃处理后仍有较高的抗菌活性,抗菌活性随着热处理温度的升高及时间的延长而降低。
5.SDS-PAGE结果显示,经诱导后的角类肥蛛免疫血淋巴中的蛋白组分与对照相比有所差异,在经过诱导后的血淋巴中不仅有多出的蛋白带,也发生缺失蛋白带的现象。
6.角类肥蛛免疫血淋巴的抑菌谱测定表明,角类肥蛛免疫血淋巴粗提液对11种供试细菌中的10种均有抑菌效果,且对革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌均有抑菌效果,提示角类肥蛛免疫血淋巴具有较广谱的抗菌活性。