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研究背景:动脉粥样硬化(AS)是现在世界范围内最普遍存在的严重威胁人类健康的心血管疾病之一。随着肥胖和糖尿病患病人口比例的不断上升,由动脉粥样硬化引起的心血管疾病如冠心病(CHD)等已经成为全球人口死亡的主要原因。冠状动脉的粥样硬化的情况也已经成为临床上考察心血管系统是否健康的重要检测项目。因此,寻找动脉粥样硬化药物的研究成为国内外药物研究的热点。
很多学者认为,动脉粥样硬化的发展进程从童年就已经开始了,它缓慢且不易察觉的发展,直到我们步入中年时才表现出症状。肥胖、高血压、高脂血症和糖尿病等代谢紊乱疾病是动脉粥样硬化诱发的主要因素。而动脉粥样硬化顽固斑块一旦形成,则很难将其清除根治。所以,对于动脉粥样硬化的预防就显得尤为重要。
PPAR-α能调控能量代谢、抑制炎症反应、和保护内皮功能,与动脉粥样硬化发生发展密切相关,故而成为防治动脉粥样硬化的重要研究靶点,目前PPAR-α的合成配体己成为临床治疗心血管疾病的一线药物。因此,OEA作为PPAR-α的内源性配体,其抗动脉粥样硬化的作用亟待研究。
目的:探讨OEA对动脉粥样硬化发展进程中各个环节的作用、相关机制及其动物模型中的作用效果。方法:采用ox-LDL诱导HUVEC非正常增值及凋亡、VSMC迁移和巨噬细胞内炎性反应;采用大鼠动脉球囊拉伤致粥样硬化模型及ApoE敲除小鼠动脉粥样硬化模型;使用Annexin V/PI染色和流式细胞技术检测OEA对ox-LDL诱导的内皮细胞凋亡的作用;使用CCK-8试剂盒检测OEA对ox-LDL诱导的内皮细胞非正常增值的作用;使用transwell小室检测OEA对ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞迁移的作用;使用荧光定量PCR技术和酶联免疫吸附实验技术检测OEA在体外和体内实验中对PPAR-α、M-CSF、TNF-α、IL-6、iNOS和COX-2等基因mRNA和蛋白表达的影响;使用石蜡切片、H-E染色法检测OEA对动物模型腹主动脉组织病变的作用;使用油红O染色法直观检测OEA对ApoE敲除小鼠动脉粥样硬化的作用;使用化学反应试剂盒检测检测OEA对动物模型血清中总胆固醇、甘油三酯、LDL、HDL、ox-LDL及TNF-α的作用。结果:本论文实验结果显示,OEA能够显著抑制由ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞的非正常增殖和凋亡;同时,OEA能够抑制ox-LDL诱导的大鼠血管平滑肌细胞迁移;在巨噬细胞中,ox-LDL能够诱导TNF-α、CRP、M-CSF、IL-6、iNOS及COX-2的表达升高,PPAR-α表达降低,OEA能够逆转这些变化,且OEA的这种作用可被PPAR-α拮抗剂——MK886拮抗。在大鼠动脉球囊拉伤致粥样硬化和ApoE敲除小鼠动脉粥样硬化模型中,OEA可降低血脂,提高抗动脉粥样硬化因子的表达,降低炎症,从而起到良好的抗动脉粥样硬化作用。结论:OEA通过激活PPAR-α途径保护内皮细胞、抑制平滑肌细胞迁移并抑制炎症,对动脉粥样硬化发展进程起到强大的抑制作用。