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中药材车前子（Plantaginis Semen）为车前科植物车前或平车前的干燥成熟种子。车前子味苷、性寒、无毒，入肝、肾、肺、小肠经，具有清热利尿通淋，渗湿止泻，明目，祛痰的功效。用于热淋涩痛，水肿胀满，暑湿泄泻，目赤胀痛，痰热咳嗽。车前子含有多种化学成分，主要有苯乙醇苷、环烯醚萜、黄酮、多糖等。本实验将车前子用80%乙醇加热回流提取，提取物经硅胶和ODS柱层析以及重结晶等方法，得到了8个单体化合物。利用质谱、核磁共振、红外等多种波谱学方法并结合其理化性质，鉴定了这8个化合物的结构，它们分别是腺嘌呤核苷、麻叶千里光苷B、野漆树苷、乙基葡萄糖苷、1-辛烯-3-醇3-O-β-D-吡喃木糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷、京尼平苷酸、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、麦角甾苷。其中腺嘌呤核苷、麻叶千里光苷B和乙基葡萄糖苷为首次从车前子中分得。本实验还建立了车前子中腺嘌呤核苷含量的HPLC测定方法。一、车前子的提取、分离和结构鉴定1、提取将10Kg车前子用80%乙醇回流提取三次，乙醇用量比药材重量分别为10、8、8倍（V/W），回流时间分别为1.5h、1.0h、1.0h，合并三次提取液，回收溶剂，得到车前子粗提物。2、分离与纯化将车前子乙醇粗提取物，用洗脱剂I进行硅胶柱层析。收集洗脱液并经TCL检测，合并相同组分，得到A、B、C、D，E，F，G七个部分。1)将C部分使用硅胶柱层析，以乙酸乙酯-乙醇-水作为流动相进行梯度洗脱得到C1-C3。将C1反复使用ODS柱层析纯化，得到化合物CQZ-8。2)将D部分使用硅胶柱层析分离，洗脱剂Ⅲ洗脱，得到D1，D2，D3三个组分，从D2，D3中结晶分别得到化合物CQZ-1和CQZ-2。D1使用ODS柱层析分离，以洗脱剂Ⅳ洗脱，得到化合物CQZ-3和CQZ-5。3)将E部分使用硅胶柱层析（洗脱剂Ⅵ）分离，得到E1和E2两个组分。将E1使用硅胶柱层析（洗脱剂Ⅶ）分离，得到化合物CQZ-4。将E2使用硅胶柱层析（脱剂Ⅷ）纯化，得到化合物CQZ-6。4）将F部分进行硅胶柱层析，以乙酸乙酯-乙醇-水梯度洗脱，到其中一个组分F1。将F1反复使用ODS柱层析（洗脱剂Ⅸ）纯化，得到化合物CQZ-7。3、结构鉴定利用核磁共振和质谱等波谱学手段并结合理化性质鉴定了8个化合物的结构，它们分别是腺嘌呤核苷、麻叶千里光苷B、野漆树苷、乙基葡萄糖苷、1-辛烯-3-醇-3-O-β-D-吡喃木糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷、京尼平苷酸、芹菜素7-O-葡萄糖苷、麦角甾苷。二、HPLC法测定车前子中腺嘌呤核苷的含量1、仪器和色谱条件高效液相色谱仪：Agilent1200HPLC色谱柱：Prevail C18（250mm×4.6mm，5mm）色谱条件：流动相：乙腈-水=5:95流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：255nm；进样量：20μL。2、方法学考察2.1线性关系腺嘌呤核苷在0.012-1.20μg的范围内峰面积（S）和进样浓度（X）均呈现良好的线性关系。线性回归方程和相关系数如下：y=3211x-6.5467， R2=0.99902.2检测限和定量限腺嘌呤核苷的信噪比（S/N）分别为3.0和10.0时，对应的CQZ-1的检测限为13ng，定量限为40ng。2.3精密度实验结果表明化合物腺嘌呤核苷的峰面积的日内和日间精密度的RSD值分别为0.13%和0.20%，说明精密度良好。2.4重复性测定六份样品溶液，结果显示腺嘌呤核苷含量的RSD值为1.34%，表明重复性良好。2.5加样回收率腺嘌呤核苷的平均加样回收率为99.85%，回收率的RSD值为0.90%，表明回收率良好。3、含量测定在三个不同产地的车前子中腺嘌呤核苷的平均含量分别是50.3、44.8、46.9μg/g。4、总结本实验深入研究了车前子的化学成分，首次从车前子中分离得到腺嘌呤核苷、麻叶千里光苷B、乙基葡萄糖苷，建立了车前子中腺嘌呤核苷含量的HPLC测定方法，为车前子质量标准的完善提供了含量测定指标，也为车前子的开发利用提供了新的科学依据。