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本研究分为两部分。
第一部分 P2Y12受体抑制剂对骨癌痛大鼠痛阈及脊髓p38丝裂原活化蛋白激酶表达的影响
目的：鞘内注射P2Y12受体抑制剂MRS2395，研究脊髓P2Y12受体在大鼠骨癌痛中的作用及其对p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响。
方法：雌性SD大鼠40只，用随机数字表法分为5组(n=8):正常组(N)、假手术组(S)、DMSO溶剂骨癌痛组(DA)、骨癌痛组(A)、骨癌痛镇痛组(MA)。N组大鼠不进行任何处理，S组大鼠左胫骨上端骨髓腔注入Hanks液10μl，DA组、A组、MA组大鼠左胫骨上段注入经腹水培养的Walker256癌细胞10μl建立骨癌痛模型。除N组外，其余四组大鼠建立骨癌痛模型的同时，选择腰3-4间隙行鞘内注管，建模后第9-12天各组大鼠每日分别行鞘内注药，S组、A组注射0.9％生理盐水，DA组注射5％二甲基亚砜(DMSO)溶剂，MA组注射MRS2395（400pmol/μl，溶于5％DMSO溶液），容量各15μl。鞘内注药前、后每10分钟测量一次大鼠左后足机械痛阈。术后第12天鞘内注药测定机械痛阈值后，取L4-6脊髓，采用免疫组化及免疫荧光法测定脊髓背角磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)表达水平。
结果：各组大鼠基础痛阈值无统计学差异（P＞0.05）;建模后第9天，与N组、S组比较，DA组、A组、MA组大鼠左后足机械痛阈值下降(P＜0.01);MA组与DA组、A组比较，鞘内注射P2Y12受体抑制剂后大鼠机械痛阈值增高，差异具有统计学意义（P＜0.05），但与N组、S组比较，MA组机械痛阈值仍低于正常（P＜0.01）。第9-11天给药后第20分钟痛阈峰值，与造模后第9天首次给药前的基础痛阈值比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。采用盲法测定阳性细胞数以及IOD数值反映磷酸化p38MAPK蛋白表达水平:DA组、A组、MA组脊髓p-p38MAPK蛋白表达高于N组、S组，差异具有统计学意义（P＜0.01）。与DA组、A组比较，MA组脊髓p-p38MAPK表达减少，差异具有统计学意义（P＜0.01）;免疫荧光双标显示脊髓背角p-p38MAPK与小胶质细胞共表达，而与星形胶质细胞和神经元未见共表达。
结论：鞘内注射P2Y12受体抑制剂MRS2395可能通过抑制脊髓背角的p38MAPK磷酸化程度部分减轻大鼠骨癌疼痛。
第二部分 P2Y12受体抑制剂对骨癌痛大鼠脊髓IL-1β、I L-6表达的影响
目的：观察鞘内注射P2Y12受体抑制剂MRS2395对骨癌痛大鼠炎性因子表达的影响，探讨P2Y12受体与炎性因子在骨癌痛发病机制中的可能作用。
方法：雌性SD大鼠32只，采用随机数字表法均分为四组(n=8):假手术组（S组）、MRS2395组（M组）、胫骨癌痛组（A组）、胫骨癌痛MRS2395镇痛组（MA组）。S组:左胫骨上端骨髓腔注入Hanks液10μl，模型制备成功后第9-12天，鞘内注射0.9％生理盐水15μl/d;M组左胫骨上端骨髓腔注入Hanks液10μl模型制备成功后第9-12天，鞘内注射MRS2395(400 pmol/μl)15μl/d;A组:左胫骨上端骨髓腔注入Walker256癌细胞悬液10μl，模型制备成功后第9-12天，鞘内注射0.9％生理盐水15μl/d;MA组:左胫骨上端骨髓腔注入Walker256癌细胞悬液10μl，模型制备成功后第9-12天，鞘内注射MRS2395(400pmol/μl)15μl/d。骨癌痛造模同时均进行腰3-4间隙鞘内置管，术后第9-12天鞘内注药前、后每10分钟测试一次大鼠左后足机械痛阈值，术后第12天鞘内注药测定机械痛阈值后，取L4-L6脊髓，采用酶联免疫吸附测定法测脊髓炎性因子IL-1β、IL-6的表达情况。
结果：建模后第9天，与N组、S组比较，A组、MA组机械性痛阈值下降(P＜0.01)，与A组比较，MA组大鼠鞘内注射MRS2395后大鼠机械痛阈值增高(P＜0.05)。Elisa结果显示:N组与S组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;与N组、S组比较，A组和MA组大鼠脊髓IL-1β和IL-6含量均明显升高(P＜0.01);与A组比较，MA组大鼠鞘内注射MRS2395后IL-1β和IL-6含量明显降低（P＜0.01），差异有统计学意义。
结论：鞘内注射P2Y12受体抑制剂MRS2395可部分减少骨癌痛大鼠脊髓炎性因子IL-1β和IL-6的表达，因而脊髓小胶质细胞P2Y12受体介导了炎性因子的释放。