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目的：
脓毒症是宿主对感染的反应失控导致的危及生命的器官功能障碍。脓毒症早期如果持续的全身炎症反应得不到有效的控制，会导致全身组织、重要器官和微循环灌注减少，进一步导致多脏器功能障碍综合征(Multiple organ dysfunction syndrome，MODS)的发生。当MODS形成后，即使感染已被控制，脓毒症对脏器功能的损伤可能难以恢复如初，往往会导致预后和转归不理想，甚至死亡。
脓毒症相关肝损伤是脓毒症非常常见的并发症之一，可发生在脓毒症进程的每一个阶段。肝脏是脓毒症MODS中发生时间最早的脏器之一，受损伤程度一般也较为显著。肝功能不全是脓毒症发展为多脏器功能障碍甚至衰竭的标志之一。目前，脓毒症及脓毒症相关肝损伤的治疗在急危重症领域仍然是一个十分严峻的难题。脓毒症相关性肝功能障碍的发生率很难估计。而且，脓毒症患者肝功能障碍会使其预后急剧恶化。虽然一直受到医学界的广泛关注、高度重视和深入研究，但是目前的诊治措施仍不能有效降低其发病率和病死率。由于治疗方法的局限性，脓毒症及脓毒症合并肝功能损伤的病死率居高不下。早期识别和处理脓毒症相关性肝功能障碍是改善预后的关键。
近年来，很多研究发现炎性因子在脓毒症相关肝损伤的过程中发挥了重要作用。巨噬细胞迁移抑制因子（Macrophage migration inhibitory factor,MIF）是机体在炎症反应过程中分泌的一种限制巨噬细胞移动的因子。近年来发现MIF还在许多疾病中的表达都有所提高，如阿尔兹海默病、类风湿性关节炎、肿瘤等，并在疾病的进展过程中起到了重要作用。此外，MIF能够直接参与到脓毒症导致的急性肝损伤过程中，而且可以加重脓毒症相关的多个脏器功能损伤。脓毒症发生过程中，内毒素进入血液循环，激活转录因子核因子-κB（NF-κB），进一步启动靶基因的转录和表达，从而导致免疫系统和血管内皮系统激活并释放MIF、TNF-α、IL-1β等多种炎症因子。MIF在脓毒症早期炎症反应中发挥非常重要的作用，可以启动TNF-α、IL-1、IL-6等多种炎症因子表达和分泌，形成“瀑布样”级联反应，最终导致包括肝脏在内的多种脏器功能损伤。但是，在脓毒症肝损伤中MIF的表达规律以及MIF造成肝功能损伤的具体机制，目前仍然没有完全清楚。
本研究分为两个部分，从动物实验到临床资料探讨MIF在脓毒症肝损伤时的表达规律以及MIF造成肝功能损伤的具体机制。在动物实验部分，我们拟构建MIF基因敲除小鼠，从基因水平抑制MIF表达，验证MIF在改善脓毒症小鼠肝损伤及提高其存活率方面的作用。同时，使用MIF抑制剂对体内MIF进行药理学抑制，来进一步证实我们的假设，进一步揭示MIF与脓毒症肝损伤的关系，为脓毒症肝损伤的诊断和治疗提供新的靶点。在临床水平，我们拟选取脓毒症肝损伤患者，分析其人口学资料、临床化验指标及MIF等炎症因子水平，来阐明脓毒症相关肝损伤的致病因素、疾病类型分类和预后。
方法：
1.SPF级6～8周龄雄性C57/BL6小鼠随机分为五组：空白对照组（0.9%NaCl4ml/kg腹腔注射）、LPS组（LPS25mg/kg腹腔注射）、LPS+ISO-1组（LPS25mg/kg+ISO-130mg/kg腹腔注射）、LPS+4IPP组(LPS25mg/kg+4IPP30mg/kg腹腔注射)、MIF-/-组（MIF基因敲除+LPS25mg/kg腹腔注射），每组8只。72小时后分别收集小鼠内眦静脉血，检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）等指标，然后采用ELISA检测血清MIF、TNF-α及IL-1β浓度。处死小鼠后分离肝脏组织，一部分用做HE染色，观察肝脏的病理变化，一部分用做RT-PCR，用于定量检测脓毒症肝脏组织中MIF、TNF-α、IL-1β和NF-kB p65的mRNA表达。
2.本研究纳入郑州大学第一附属医院2018年1月至2019年12月收治的118例确诊脓毒症患者，另外选取同期健康志愿者30人作为健康对照组。所有人在纳入研究之前均已签署知情同意书。所有入组病例收集临床资料，包括人口学资料、临床表型描述及各项化验指标，同时进行序贯器官衰竭评分（SOFA）。抽取外周血样品后，一部分送生化室进行降钙素原（Procalcitonin，PCT）、血小板、血乳酸、血肌酐、脑钠肽（Brain natriuretic peptide，BNP）、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、血清白蛋白等指标的检测。另一部分用ELISA试剂盒进行炎症因子MIF、TNF-α、IL-1β的检测。
结果：
1.MIF基因敲除可减少脓毒症小鼠血清中的炎症介质并减轻脓毒症小鼠肝损伤
在LPS诱导脓毒症72h后，MIF-/-小鼠的ALT、AST和TBIL水平显著低于野生型小鼠。野生型脓毒症小鼠血清MIF、TNF-α、IL-1β水平显著升高，MIF-/-小鼠中未检测到MIF表达。MIF-/-组TNF-α和IL-1β比LPS组明显降低。组织病理学评估证明，脓毒症组的肝脏显示出严重损伤，具有广泛的炎性细胞浸润和大量的肝细胞坏死，MIF基因敲除可以减轻脓毒症小鼠肝损伤。
RT-PCR用于肝脏组织中MIF、TNF-α、IL-1β和NF-кB mRNA的表达。与空白对照组相比，野生型脓毒症小鼠组MIF、TNF-α、IL-1β和NF-кB mRNA的表达显著上调。MIF-/-组TNF-α、IL-1β和NF-кB mRNA的表达水平与空白对照组小鼠相似。
2.MIF抑制剂ISO-1、4IPP可减少脓毒症肝损伤小鼠血清炎症介质并减轻脓毒症肝损伤的严重程度
与脓毒症组相比，ISO-1、4IPP预处理的小鼠在脓毒症诱导后血清ALT、AST及TBIL水平显著降低，血清MIF、TNF-α和IL-1β的水平也显著降低。组织病理学评估证明，ISO-1、4IPP预处理可减轻脓毒症小鼠肝损伤。
RT-PCR检测显示，在ISO-1、4IPP预处理组中，MIF、TNF-α、IL-1β和NF-кB mRNA的表达都呈下降趋势，与MIF基因敲除具有类似效果。在脓毒症诱导前用ISO-1、4IPP进行预处理，可减轻脓毒症小鼠肝损伤。
3.MIF基因敲除和MIF抑制剂预处理可以提高脓毒症肝损伤小鼠72小时存活率，为脓毒症肝损伤的致死作用提供了显著的保护。
4.脓毒症相关肝损伤患者的血清MIF、TNF-α、IL-1β水平比健康对照组明显升高，差异有统计学意义。脓毒症肝损伤患者ALT、AST和TBIL水平较脓毒症非肝损伤患者明显升高。Logistic回归分析显示，饮酒史（P＜0.01）、休克（P＜0.01）是脓毒症相关急性肝损伤的独立危险因素。脓毒症肝损伤最常见的感染部位为腹腔感染，其次是肺部感染。脓毒症肝损伤组患者病死率显著高于脓毒症非肝损伤组。Logistic回归分析显示，老年患者(年龄66.17±5.97岁)、凝血功能障碍、多脏器功能衰竭、酸中毒、休克是脓毒症肝损伤患者死亡的独立危险因素，P＜0.05。
结论：
1.MIF参与了脓毒症的炎症反应和脓毒症相关肝损伤。
2.MIF基因敲除及MIF的药理学抑制剂均可显著减轻脓毒症及脓毒症肝损伤的严重程度，提高脓毒症肝损伤小鼠的生存率。
3.脓毒症肝损伤患者的血清炎症因子水平显著升高。饮酒史、休克是脓毒症诱发急性肝损伤的独立致病危险因素。脓毒症肝损伤患者预后差、病死率高。老年患者、凝血功能障碍、多脏器功能衰竭、酸中毒、休克是脓毒症肝损伤患者死亡的独立危险因素。
脓毒症是宿主对感染的反应失控导致的危及生命的器官功能障碍。脓毒症早期如果持续的全身炎症反应得不到有效的控制，会导致全身组织、重要器官和微循环灌注减少，进一步导致多脏器功能障碍综合征(Multiple organ dysfunction syndrome，MODS)的发生。当MODS形成后，即使感染已被控制，脓毒症对脏器功能的损伤可能难以恢复如初，往往会导致预后和转归不理想，甚至死亡。
脓毒症相关肝损伤是脓毒症非常常见的并发症之一，可发生在脓毒症进程的每一个阶段。肝脏是脓毒症MODS中发生时间最早的脏器之一，受损伤程度一般也较为显著。肝功能不全是脓毒症发展为多脏器功能障碍甚至衰竭的标志之一。目前，脓毒症及脓毒症相关肝损伤的治疗在急危重症领域仍然是一个十分严峻的难题。脓毒症相关性肝功能障碍的发生率很难估计。而且，脓毒症患者肝功能障碍会使其预后急剧恶化。虽然一直受到医学界的广泛关注、高度重视和深入研究，但是目前的诊治措施仍不能有效降低其发病率和病死率。由于治疗方法的局限性，脓毒症及脓毒症合并肝功能损伤的病死率居高不下。早期识别和处理脓毒症相关性肝功能障碍是改善预后的关键。
近年来，很多研究发现炎性因子在脓毒症相关肝损伤的过程中发挥了重要作用。巨噬细胞迁移抑制因子（Macrophage migration inhibitory factor,MIF）是机体在炎症反应过程中分泌的一种限制巨噬细胞移动的因子。近年来发现MIF还在许多疾病中的表达都有所提高，如阿尔兹海默病、类风湿性关节炎、肿瘤等，并在疾病的进展过程中起到了重要作用。此外，MIF能够直接参与到脓毒症导致的急性肝损伤过程中，而且可以加重脓毒症相关的多个脏器功能损伤。脓毒症发生过程中，内毒素进入血液循环，激活转录因子核因子-κB（NF-κB），进一步启动靶基因的转录和表达，从而导致免疫系统和血管内皮系统激活并释放MIF、TNF-α、IL-1β等多种炎症因子。MIF在脓毒症早期炎症反应中发挥非常重要的作用，可以启动TNF-α、IL-1、IL-6等多种炎症因子表达和分泌，形成“瀑布样”级联反应，最终导致包括肝脏在内的多种脏器功能损伤。但是，在脓毒症肝损伤中MIF的表达规律以及MIF造成肝功能损伤的具体机制，目前仍然没有完全清楚。
本研究分为两个部分，从动物实验到临床资料探讨MIF在脓毒症肝损伤时的表达规律以及MIF造成肝功能损伤的具体机制。在动物实验部分，我们拟构建MIF基因敲除小鼠，从基因水平抑制MIF表达，验证MIF在改善脓毒症小鼠肝损伤及提高其存活率方面的作用。同时，使用MIF抑制剂对体内MIF进行药理学抑制，来进一步证实我们的假设，进一步揭示MIF与脓毒症肝损伤的关系，为脓毒症肝损伤的诊断和治疗提供新的靶点。在临床水平，我们拟选取脓毒症肝损伤患者，分析其人口学资料、临床化验指标及MIF等炎症因子水平，来阐明脓毒症相关肝损伤的致病因素、疾病类型分类和预后。
方法：
1.SPF级6～8周龄雄性C57/BL6小鼠随机分为五组：空白对照组（0.9%NaCl4ml/kg腹腔注射）、LPS组（LPS25mg/kg腹腔注射）、LPS+ISO-1组（LPS25mg/kg+ISO-130mg/kg腹腔注射）、LPS+4IPP组(LPS25mg/kg+4IPP30mg/kg腹腔注射)、MIF-/-组（MIF基因敲除+LPS25mg/kg腹腔注射），每组8只。72小时后分别收集小鼠内眦静脉血，检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）等指标，然后采用ELISA检测血清MIF、TNF-α及IL-1β浓度。处死小鼠后分离肝脏组织，一部分用做HE染色，观察肝脏的病理变化，一部分用做RT-PCR，用于定量检测脓毒症肝脏组织中MIF、TNF-α、IL-1β和NF-kB p65的mRNA表达。
2.本研究纳入郑州大学第一附属医院2018年1月至2019年12月收治的118例确诊脓毒症患者，另外选取同期健康志愿者30人作为健康对照组。所有人在纳入研究之前均已签署知情同意书。所有入组病例收集临床资料，包括人口学资料、临床表型描述及各项化验指标，同时进行序贯器官衰竭评分（SOFA）。抽取外周血样品后，一部分送生化室进行降钙素原（Procalcitonin，PCT）、血小板、血乳酸、血肌酐、脑钠肽（Brain natriuretic peptide，BNP）、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、血清白蛋白等指标的检测。另一部分用ELISA试剂盒进行炎症因子MIF、TNF-α、IL-1β的检测。
结果：
1.MIF基因敲除可减少脓毒症小鼠血清中的炎症介质并减轻脓毒症小鼠肝损伤
在LPS诱导脓毒症72h后，MIF-/-小鼠的ALT、AST和TBIL水平显著低于野生型小鼠。野生型脓毒症小鼠血清MIF、TNF-α、IL-1β水平显著升高，MIF-/-小鼠中未检测到MIF表达。MIF-/-组TNF-α和IL-1β比LPS组明显降低。组织病理学评估证明，脓毒症组的肝脏显示出严重损伤，具有广泛的炎性细胞浸润和大量的肝细胞坏死，MIF基因敲除可以减轻脓毒症小鼠肝损伤。
RT-PCR用于肝脏组织中MIF、TNF-α、IL-1β和NF-кB mRNA的表达。与空白对照组相比，野生型脓毒症小鼠组MIF、TNF-α、IL-1β和NF-кB mRNA的表达显著上调。MIF-/-组TNF-α、IL-1β和NF-кB mRNA的表达水平与空白对照组小鼠相似。
2.MIF抑制剂ISO-1、4IPP可减少脓毒症肝损伤小鼠血清炎症介质并减轻脓毒症肝损伤的严重程度
与脓毒症组相比，ISO-1、4IPP预处理的小鼠在脓毒症诱导后血清ALT、AST及TBIL水平显著降低，血清MIF、TNF-α和IL-1β的水平也显著降低。组织病理学评估证明，ISO-1、4IPP预处理可减轻脓毒症小鼠肝损伤。
RT-PCR检测显示，在ISO-1、4IPP预处理组中，MIF、TNF-α、IL-1β和NF-кB mRNA的表达都呈下降趋势，与MIF基因敲除具有类似效果。在脓毒症诱导前用ISO-1、4IPP进行预处理，可减轻脓毒症小鼠肝损伤。
3.MIF基因敲除和MIF抑制剂预处理可以提高脓毒症肝损伤小鼠72小时存活率，为脓毒症肝损伤的致死作用提供了显著的保护。
4.脓毒症相关肝损伤患者的血清MIF、TNF-α、IL-1β水平比健康对照组明显升高，差异有统计学意义。脓毒症肝损伤患者ALT、AST和TBIL水平较脓毒症非肝损伤患者明显升高。Logistic回归分析显示，饮酒史（P＜0.01）、休克（P＜0.01）是脓毒症相关急性肝损伤的独立危险因素。脓毒症肝损伤最常见的感染部位为腹腔感染，其次是肺部感染。脓毒症肝损伤组患者病死率显著高于脓毒症非肝损伤组。Logistic回归分析显示，老年患者(年龄66.17±5.97岁)、凝血功能障碍、多脏器功能衰竭、酸中毒、休克是脓毒症肝损伤患者死亡的独立危险因素，P＜0.05。
结论：
1.MIF参与了脓毒症的炎症反应和脓毒症相关肝损伤。
2.MIF基因敲除及MIF的药理学抑制剂均可显著减轻脓毒症及脓毒症肝损伤的严重程度，提高脓毒症肝损伤小鼠的生存率。
3.脓毒症肝损伤患者的血清炎症因子水平显著升高。饮酒史、休克是脓毒症诱发急性肝损伤的独立致病危险因素。脓毒症肝损伤患者预后差、病死率高。老年患者、凝血功能障碍、多脏器功能衰竭、酸中毒、休克是脓毒症肝损伤患者死亡的独立危险因素。