论文部分内容阅读
目的端粒酶是一种核糖核蛋白复合物，在人类正常体细胞中不表达，而在约85％的肿瘤细胞中，端粒酶活性被重新激活，强烈提示端粒酶重新激活在肿瘤发生中发挥着重要作用，已经证实端粒酶逆转录酶（telomerase reverse transcriptase）是端粒酶活性的关键限速因子。本研究探讨端粒酶hTERT mRNA表达在人乳腺癌发生、发展中的意义以及在乳腺癌诊断中的价值；并观察肿瘤抑制基因TP53及原癌基因c-Myc与hTERT mRNA表达的关系，以期为以hTERT为靶点的肿瘤治疗提供实验依据。方法收集癌旁正常乳腺组织、乳腺导管上皮单纯性增生、导管上皮不典型增生、导管原位癌、浸润性导管癌病例，采用分子原位杂交法进行组织原位检测hTERT mRNA转录情况；并采用荧光实时定量RT-PCR技术（Fluorescence quqntitative real-time RT-PCR）定量检测hTERT和c-Myc基因的转录水平，同时采用免疫组化方法检测P53蛋白及c-myc蛋白表达情况。结果1)分子原位杂交检测显示hTERT mRNA在癌旁正常乳腺组织、乳腺导管单纯性增生中未见表达，在导管上皮不典型增生、导管原位癌、浸润性导管癌中的阳性率分别为25％（5／20）、83.33％（15／18）和88.00％（22／25），后两组hTERT mRNA表达明显高于前三组（P＜0.05）；hTERT mRNA表达与乳腺浸润性导管癌的预后因素如肿块大小、淋巴结转移与否及激素表达水平无相关性（P＞0.05）。2)乳腺导管癌中hTERT mRNA与P53蛋白表达呈正相关（γ=0.3884，P＜0.05）。3)荧光实时定量RT-PCR定量检测hTERT基因转录水平显示，如以NhTERT=10为临界值，所有正常组织和良性病变的NhTERT值均小于此临界值，而hTERT基因转录升高的导管原位癌及浸润性导管癌的NhTERT值均大于此临界值。4)荧光实时定量RT-PCR定量检测显示hTERT和c-Myc基因转录水平呈正相关（γ=0.7395，P＜0.01），hTERT转录水平与c-myc蛋白表达也呈正相关（γ=0.6118，P＜0.01）。结论端粒酶hTERT的表达可能在乳腺癌的组织发生中起关键作用，端粒酶活性上调是乳腺癌发生的早期事件，是癌前病变向癌进展的转折点。荧光实时定量RT-PCR技术检测hTERT基因表达具有高敏感性和特异性，能为常规病理学诊断提供客观的参考指标，从而提高乳腺良恶性病变，特别是导管上皮不典型增生与导管原位癌鉴别诊断的准确性。抑癌基因TP53功能失活及原癌基因c-Myc转录水平上调可能与乳腺癌hTERT基因转录激活有关。