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猪精原干细胞(Spermatogonial Stem Cells,SSCs)的敏感性使其易受外界物质的影响。通过研究外源物质对SSCs的损伤机制、找寻可促进SSCs增殖分化的有益物质,对提高公猪的生产性能有着重要的意义。为探究不同添加物对猪SSCs的影响机制,本研究利用差速贴壁法及免疫磁珠法分离了7日龄大白公猪睾丸内的SSCs,经形态学观察、碱性磷酸酶染色、标记基因检测及免疫荧光染色鉴定后以SSCs作为试验材料,研究外源添加物对猪SSCs的影响及其机制。主要研究结果如下:1.设置不同浓度玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)处理SSCs,CCK8检测细胞活力发现ZEA在浓度大于25μmol/m L、处理时间大于24h时可导致SSCs活力显著下降。随着ZEA浓度上升SSCs内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)、脂质过氧化物丙二醛(Malonydialdehyde,MDA)含量显著增加;线粒体膜电位、总超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活力及谷胱甘肽(Glutathione,GSH)量显著下降。2.实时定量PCR检测显示ZEA可使凋亡基因Bax、Caspase3、Fas、P53m RNA水平升高,Bcl-2基因m RNA水平下降。Western Blot检测显示Caspase3蛋白表达、Bax/Bcl-2比例随ZEA浓度增加而上升,SOD2蛋白表达随ZEA浓度上升而下降。3.原花青素(Proantho cyanidins,PC)、叶酸(Folic acid,FA)、褪黑素(Melatonin,MT)处理SSCs,CCK8检测发现只有MT在浓度大于50μmol/m L,处理时间大于48h以上时对SSCs活力有促进作用。联合处理结果显示MT、PC可显著改善ZEA对SSCs的凋亡作用。4.随着MT浓度的增加,SSCs内ROS、MDA含量发生显著下降,GSH含量显著上升,总SOD活力与GSH含量无差异。5.实时定量PCR检测显示MT可使凋亡基因Bax、Caspase3、P53基因m RNA表达下降。Western Blot检测显示Caspase3蛋白表达与Bax/Bcl-2比例随着MT浓度升高而下降,标记蛋白UCHL1表达随着MT的添加而升高。以上结果说明ZEA会使猪SSCs产生氧化损伤,激活细胞凋亡途径引起细胞活力下降。PC、FA、MT三种物质中只有MT可促进猪SSCs活力上升,PC、MT具有改善ZEA凋亡作用的功能,MT具有清除细胞内ROS,抑制凋亡基因表达,促进猪SSCs活力的功效。