论文部分内容阅读
第一部分 玉米黄素在角膜缘干细胞和结膜上皮细胞中抗紫外线所致的细胞凋亡和氧化应激的作用目的:人眼长期受到太阳辐射,是造成眼内氧化压力的重要自然因素。为抵御和消减这种有害的压力,人眼在进化过程中发展了一整套有效的抵御氧化压力的机制,其中包括β-胡萝卜素类物质在眼底黄斑的高浓度累积。玉米黄素（zeaxanthin,Zx）就是其中的一种,它能够吸收光子,又具有抗氧化作用。本研究的目的是探讨玉米黄素在角膜缘干细胞和结膜上皮细胞中抗紫外线辐射和氧化应激的作用。方法:从用来作为角膜供体的眼表组织中分离角膜缘干细胞和结膜上皮细胞,并进行体外培养。一组给予玉米黄素预处理,另一组未给予玉米黄素预处理,然后接受紫外线（ultraviolet B,UVB）的照射或过氧化氢（H2O2）刺激。检测刺激后细胞的存活率、细胞内p38、c-JUN NH（2）-terminal kinase（JNK）)的磷酸化水平、培养液中白介素-6（interleukin-6,IL-6）、白介素-8（interleukin-8,IL-8）和单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemo-attractant protein-1,MCP-1）的分泌水平及丙二醛（malondialdehyde,MDA）的浓度。结果:培养液中添加5μg/mL及以下浓度的玉米黄素对于角膜缘干细胞和结膜细胞没有毒性。在30 mJ/cm2 UVB的照射后,经过玉米黄素预处理的角膜缘干细胞的存活率从50%增高至69%（p=0.01）,结膜上皮细胞的存活率从66%增高至75%（p=0.01）;培养液中的IL-6、MCP-1的浓度较没有经过玉米黄素预处理的细胞下降了66%,IL-8的浓度下降了56%;同时,p38和JNK的激活也随之下降。在H2O2的刺激下,经过玉米黄素预处理的角膜缘干细胞内MDA的浓度从0.86μM下降至0.526μM（p=0.02）,结膜上皮细胞内的MDA浓度从0.96μM下降至0.566μM（p=0.02）;而玉米黄素对于H2O2所诱导的角膜缘干细胞和结膜上皮细胞的死亡没有显著影响。结论:玉米黄素可以保护眼表上皮细胞减少紫外线和氧化压力造成的损害。第二部分（1）血糖对眼房水氧化压力状态的影响目的:探讨血糖和眼房水的氧化压力变化的相关性方法:选取自2016年7月到2016年10月在新华医院行白内障超声乳化并进行人工晶体植入术的白内障患者71例。入组标准:本人否认有除糖尿病（无严重糖尿病并发症,但糖尿病视网膜病变除外）外其他严重系统性疾病,术前检查肝功能,肾功能和血常规均正常,无其他眼内疾病史,无眼内激光史,无眼外伤和眼内手术史的患者。排除标准:不符合上述要求,年龄低于60岁,无法自主签署知情同意书,平时服用维生素或抗氧化剂的患者。该研究得到了新华医院伦理委员会的批准,并遵循《赫尔辛基宣言》的原则。在解释研究的性质和可能的结果后,所有参与者都提供了知情同意书。所有患者跟进血糖和年龄综合分组如下:根据患者是否有糖尿病史以及术前的空腹血糖分成四组。1,2,3组患者否认糖尿病史,第4组患者原有糖尿病史。1组患者30例,空腹血糖小于5.6mmol/l,为正常血糖组;2组患者20例,空腹血糖大于等于5.6mmol/l,小于7.0mmol/l,为血糖临界组;3组患者10例,空腹血糖大于等于7.0mol/l,为血糖增高组;4组患者,11例,有糖尿病史,为糖尿病组。根据年龄分组,A组患者9例,年龄小于70岁,男6例,女3例;B组患者20例,年龄介于70到80岁,男12例,女8例;C组患者34例,年龄介于80到90岁,男15例,女19例;D组患者8例,年龄大于等于90岁,男3例,女5例。在此基础上血糖1组的患者再根据年龄分成4组:1A组患者3例,年龄小于70岁;1B组患者8例,年龄介于70到80岁;1C组患者15例,年龄介于80到90岁;1D组患者4例,年龄大于等于90岁。同上,血糖1组+2组的患者也再根据年龄分成4组。每位患者在空腹状态下取静脉血5m L,静置1-2小时后取血浆,在超声乳化手术前行前房穿刺取前房水50-100μl。房水氧化压力水平的检测指标为房水中丙二醛（malondialdehyde,MDA）的水平和总抗氧化能力（total anti-oxidant capacity,TAC）,同时检测患者血浆中的MDA浓度。结果:在根据血糖分组的患者之间,1组（血糖正常组）,2组（血糖临界组）,3组（血糖增高组）患者眼房水中的MDA水平与4组（糖尿病组）患者眼房水中的MDA水平比较均有显著统计学意义的差异（P<0.001）。Pearson相关性分析显示,房水中的MDA水平与空腹血糖水平两者呈正相关（r=0.593,P<0.001）。而血浆中的MDA水平在各组间无统计学差异。在根据年龄分组的患者间,房水或血浆中的MDA水平均无统计学差异。房水中TAC水平不管在空腹血糖水平不同的各组患者中还是在年龄不同的各组患者中都没有统计学差异。在1组患者中发现房水中的MDA水平和TAC水平两者呈正相关（r=0.402,p=0.034）。结论:房水中MDA的水平与血糖水平的升高有很强的相关性,所以高血糖可能是导致眼房水中脂质过氧化产物增多的一个重要因素。而房水中TAC水平不因血糖或年龄的影响而变化,是一个比较稳定的值。第二部分（2）抗VEGF药物（康柏西普）对增殖性糖尿病视网膜病变患者房水中氧化应激水平和炎症因子浓度的影响目的:探讨抗血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）治疗对增殖性糖尿病视网膜病变（Proliferative diabetic retinopathy,PDR）患者房水中氧化压力水平和炎症因子浓度的影响。方法:选取2016年3月至2017年11月在新华医院眼科接受玻璃体腔康柏西普注射,并在一周后行玻璃体切除术的增殖性糖尿病视网膜病变的患者共74例入组,其中男35例,女39例。排除有其他严重的心脏、肝、肾等全身疾病史者;有青光眼,葡萄膜炎等其他眼部疾病病史者;以前有过视网膜激光、玻璃体注射药物史,一年内有眼部手术史者。每位患者在玻璃体注射康柏西普前,前房穿刺取未经稀释的房水50-100μL;一周后在行玻璃体切除术之前,再次取房水50-100μL。所有房水样本进行白介素-6（interleukin-6,IL-6）、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemo-attractant protein-1,MCP-1）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平的测定。该研究得到了新华医院伦理委员会的批准,并遵循《赫尔辛基宣言》的原则。在解释研究的性质和可能的结果后,所有参与者都提供了知情同意书。结果:玻璃体注射康柏西普7天后房水中IL-6、MCP-1水平（3889.86±6583.57pg/ml、1501.43±1012.96 pg/ml）较注射前（317.16±1763.89 pg/ml、1089.38±679.09pg/ml）显著升高,差异有统计学意义（P<0.001）;MDA水平（22.21±8.05 pg/ml）较注射前（32.03±16.80 pg/ml）显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。Spearman’s相关分析显示,患者房水中IL-6和MCP-1浓度在注射康柏西普前后始终存在比较强的相关性,其中注射前r=0.681,P<0.001,注射后r=0.614,P<0.001。IL-6和MCP-1本身在注射前后也存在较强的相关性,其中IL-6注射前后r=0.376,P<0.05,MCP-1注射前后r=0.638,P<0.001。在注射康柏西普前,患者房水中MDA和MCP-1存在较强的相关性,r=0.651,P<0.001;MDA和IL-6也存在较强的相关性,r=0.530,P<0.05。在注射康柏西普后,没有发现MDA和MCP-1、IL-6的相关性。结论:玻璃体腔注射抗VEGF药物在短期内也许并不能减低PDR患者房水中炎症因子浓度,但是可能可以减低房水中的氧化压力。