论文部分内容阅读
目的:探讨氯喹联合博来霉素和奈达铂对舌鳞癌SCC25细胞凋亡和自噬的影响及其作用机制。为临床采用氯喹作为舌鳞癌化疗辅助药物进行联合用药的治疗方式提供一定的研究基础。方法:1.通过MTT法检测所选药物对SCC25细胞的生长抑制作用,并确定所选药物的浓度。2.Hoechst33258荧光染色法观察药物处理后的细胞凋亡情况。3.流式细胞术观察药物处理后对SCC25细胞凋亡及周期的影响。4.荧光显微镜下观察自噬体。5.Transwell小室侵袭和迁移实验,观察不同药物对SCC25细胞侵袭和迁移的影响。6.Western blot检测各药物作用SCC25细胞后Bax、BcL-2、NFkB、LC3、Beclin-1、P62等蛋白表达的情况。结果:1.MTT法检测不同浓度氯喹和博来霉素及奈达铂处理SCC25细胞不同时间后,细胞生存率逐渐降低,呈浓度和时间的依赖性。浓度5mg/L的氯喹分别联合博来霉素在IC50(5mg/L)及奈达铂在IC50(7mg/L)处理后,与单独博来霉素处理及单独奈达铂处理相比而言都明显降低了SCC25细胞的生存率(p<0.05)。2.通过Hoechst33258荧光染色观察细胞形态表明与博来霉素组相比,氯喹联用博来霉素组细胞凋亡比例增高;与奈达铂组相比,氯喹联用奈达铂组的凋亡细胞比例增高(p<0.05)。3.细胞凋亡情况:与对照组相比,药物处理48h后,SCC25细胞的凋亡率显著增加(p<0.05);与博来霉素组相比,氯喹联用博来霉素组凋亡率显著增加(p<0.05);与奈达铂组相比,氯喹联用奈达铂组细胞凋亡率显著增加(p<0.05)。4.细胞周期分布:各组药物作用于SCC25细胞48h后,SCC25细胞G0/G1期比例均升高,S期及G2/M期比例均下降,氯喹联用博来霉素组的G0/G1期细胞比例高于博来霉素组(p<0.05);氯喹联用奈达铂组的G0/G1期细胞比例高于奈达铂组(p<0.05)。5.Transwell小室侵袭迁移实验结果发现与对照组相比较,各组药物处理后的SCC25细胞迁移到基底膜对面的数量和透过胶质膜后移到基底膜对面的数量都有所减少,说明药物对SCC25细胞的迁移和侵袭能力能产生明显的影响(p<0.05)。5.在荧光显微镜下观察自噬体发现相对于对照组而言,各药物组中黄色斑点和红色斑点总和均降低。6.与对照组相比,药物作用48h后,Bax、P62表达水平均增高;BcL-2、NFkB、LC3及Beclin-1蛋白表达水平降低(p<0.05)。与博来霉素组相比,氯喹联用博来霉素组的Bax、P62蛋白表达水平增高,BcL-2、NFkB、LC3和Beclin-1表达水平降低;与奈达铂组相比,氯喹联用奈达铂组的Bax、P62蛋白表达水平增高,BcL-2、NFkB、LC3和Beclin-1蛋白表达水平降低(p<0.05)。结论:相对于博来霉素或奈达铂的单一用药,氯喹合并博来霉素及奈达铂的作用效果对舌鳞癌SCC25细胞的影响表现在对其生长抑制、侵袭、迁移、凋亡周期及自噬调控等多个方面,且联合用药比单独化疗药物有更强的抑制增殖和诱导凋亡的效果。氯喹联合化疗药物可以在G0/G1期诱导发生更明显的周期阻滞,并抑制SCC25细胞的侵袭和迁移能力。这种联用效果可能是通过抑制自噬提高SCC25细胞对博来霉素和奈达铂的化疗敏感性而实现的。本研究为氯喹作为舌鳞癌化疗辅助药物,提升临床治疗效果提供了一定的研究基础。