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本项研究以常规法结合双酶法分离纯化水溶性苦瓜多糖,并对其生物功能进行了初步研究。
首先,采用常规法(即水溶醇沉法)从苦瓜果肉中提取出水溶性粗多糖PMC。然后,在提取PMC的过程中加入纤维素酶。利用正交试验确定纤维素酶的最佳酶解参数。并对提取得到的粗多糖的物理化学性质进行检测,以进一步确定其为一种水溶性、非淀粉、非果胶、不含单糖和二糖的多糖。
对提取得到的粗多糖进行分离纯化,除去色素及小分子杂质,并采用Sevage法除蛋白。然后,将中性蛋白酶与Sevage法结合,确定了中性蛋白酶的最佳酶解温度,在此条件下,同样利用正交试验确定中性蛋白酶的最佳酶解条件。
双酶法提取分离纯化得到的PMC经DEAE-32离子柱层析得到一个出现在盐洗脱部位的单一组分,收集相应峰位组分,减压浓缩后,蒸馏水透析,冷冻干燥得到的多糖样品,进一步经SephadexG-75凝胶柱层析得到一个单一对称峰,收集相应峰位组分,减压浓缩,蒸馏水透析,冷冻干燥得纯白色粉末状水溶性苦瓜多糖,命名为PMCⅠ。
对采用常规法、加入纤维素酶而未加入中性蛋白酶、加入中性蛋白酶而未入加纤维素酶及双酶法提取得到的多糖中的各成分含量分别进行测定并比较。
本实验对水溶性苦瓜多糖的生物学功能也做了初步研究。研究结果表明,水溶性苦瓜多糖具有抑菌及抗氧化双重作用。