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细菌污染精液影响常温保存猪精子质量和保存时间,同时精液里面含有的致病细菌、病毒等可能通过人工授精垂直传播给后代,猪精液常温保存、运输更加扩大传播范围。目前猪精液稀释采用添加抗生素来杀死细菌或抑制其生长,这存在抗生素滥用导致的细菌耐药性问题,而本研究期望能建立一种不加或少加抗生素的猪精液稀释液体系,从而解决抗生素滥用导致的细菌耐药性问题。通过在猪鲜精和17℃保存精液中添加聚维酮碘(PVP-Ⅰ),探讨其杀灭精液有害细菌的效果和对精子质量的影响,从而达到阻断病原菌垂直传播的目的。保存后不同时间时取样精液接种和培养,用细菌菌落计数的方法检测精液里面细菌菌落总数,并用MicroScanA/S4细菌鉴定仪鉴定细菌种类。采用计算机辅助精液分析仪(CASA)检测精子活率、活力,低渗肿胀法(HOST)检测质膜完整性、线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)测线粒体活性和考马斯亮蓝染色检测精子顶体完整性。
本研究结果如下:(1)用PVP-Ⅰ消毒猪精液时,在0-0.27 mg/ml内随着PVP-Ⅰ浓度的增加杀菌效果越好。(2)从来自广西桂牧叮原种猪场猪精液里面检测出变形杆菌、棒状杆菌、大肠杆菌、不动杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、链球菌、表皮葡萄糖球菌,没有检出沙门氏菌、克雷伯氏菌。(3)精液里面添加0.20 mg/ml和0.27 mg/ml PVP-Ⅰ能杀死棒状杆菌、大肠杆菌、不动杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、链球菌(作用1 h),但不能杀死变形杆菌。(4)在猪精液稀释液中添加0-0.20 mg/ml浓度的PVP-Ⅰ对17℃保存猪精子质量无影响;(5)0.20 mg/ml:PVP-Ⅰ能适用于猪精液17℃保存的不同稀释液配方。从上面结果可以得出以下结论:聚维酮碘在0.20 mg/ml浓度能杀死猪精液里面的棒状杆菌、大肠杆菌、不动杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、链球菌,并且对17℃保存猪精子质量常规指标(活率、活力、线粒体活性、质膜完整性和顶体完整性)无影响。
PVP-Ⅰ对通过猪精液传播细菌或病毒的杀灭效果需要进一步研究,另外PVP-Ⅰ消毒猪精液人工授精后受胎率和窝产子数也需要进一步研究。