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目的寻找食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma, ESCC）中潜在受DNA甲基化调控的微小RNA（microRNAs, miRNAs），筛选ESCC中表达差异的miRNAs，从表观遗传学的角度寻找ESCC新的生物学标志物；以期从分子水平探讨ESCC的发病机理，为ESCC的早期诊断和预后预测提供新思路和理论依据，为表观遗传学药物对ESCC的治疗提供新的靶点。方法1、应用miRBase数据库、UCSC基因组浏览器、CpG岛在线分析软件和欧洲生物信息学中心（European Bioinformatics Institute, EBI）网站等生物信息学方法预测具有CpG岛的miRNAs。2、应用miProfileTMmiRNAs qPCR引物阵列技术，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（Reverse-Transcription Polymerase Chain Reaction, RT-PCR）（Poly A加尾法）高通量检测人食管鳞状细胞癌细胞株与正常食管鳞状上皮细胞和正常人食管上皮组织的miRNAs的相对表达量（Relative Quantification,RQ）、有DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-2’-deoxycytidine, DAC）处理的人食管鳞状细胞癌细胞株与无DAC处理的食管鳞状细胞癌细胞株的相对表达量。筛选出肿瘤细胞与正常食管鳞状上皮细胞和正常人食管上皮组织的RQ均＜0.5倍且肿瘤细胞中有DAC处理与无DAC处理RQ＞2倍的miRNAs。3、对4株人食管鳞状细胞癌细胞、正常食管鳞状上皮细胞和正常人食管上皮组织的△Ct值进行对数处理后应用R软件进行聚类分析，绘制热图。4、采用实时荧光定量RT-PCR（Poly A加尾法）比较10例ESCC患者癌组织和癌旁组织15种miRNAs的相对表达量，对同一种miRNA的癌组织和癌旁组织的△Ct的组间比较均采用配对t检验。结果1、通过生物信息学预测，从1527种人的miRNAs中筛选出88种可能受甲基化调控的miRNAs。2、通过细胞实验，筛选出hsa-miR-9-5p、 hsa-miR-203、 hsa-miR-375、hsa-miR-1258、hsa-miR-1914-5p、hsa-miR-3665、hsa-miR-4470、hsa-miR-4479、hsa-miR-4530、 hsa-miR-4634、 hsa-miR-4664-5p、 hsa-miR-4665-5p、hsa-miR-4674、hsa-miR-4687-5p和hsa-miR-4734共15种潜在受DNA甲基化调控的候选miRNA。3、聚类分析结果显示：正常食管鳞状上皮细胞Het-1A和正常人食管上皮组织聚为一类，其余4株人食管鳞状细胞癌细胞聚为一类，能较好的区分食管鳞状细胞癌和正常细胞与组织。4、通过比较10例ESCC患者癌组织和癌旁组织15种miRNAs的相对表达量，hsa-miR-3665和hsa-miR-375分别有7例和6例癌组织的相对表达量小于癌旁组织的0.5倍且hsa-miR-3665的表达量差异有统计学意义（t=2.564，P=0.030）。结论1、受甲基化调控的miRNAs表达量可比较好地区分食管鳞状细胞癌和正常细胞与组织。2、Hsa-miR-3665和hsa-miR-375是我们研究发现的潜在受DNA甲基化调控、在ESCC中表达沉默的2种miRNAs。