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目的牙龈卟啉单胞菌是牙周主要致病菌之一,胶原酶蛋白Prt C是其主要致病因子之一,本研究以Prt C蛋白为研究对象,探讨来自两个不同牙龈卟啉单胞菌菌株ATCC53977和ATCC33277的prt C基因能否在大肠杆菌体内获得可溶性表达、纯化以及功能初探。材料与方法全基因合成牙龈卟啉单胞菌Porphyromonas gingivalis ATCC 53977和Porphyromonas gingivalis ATCC 33277中prt C基因,分别构建重组表达载体p28-prt C和p29-prt C,生物信息学分析和低温诱导表达、SDS-PAGE、Western blot鉴定、确定蛋白的聚集状态、酶解法验证胶原酶的功能。结果通过表达检测发现牙龈卟啉单胞菌ATCC 53977中的胶原酶蛋白Prt C未能在大肠杆菌体内获得可溶性表达。而牙龈卟啉单胞菌ATCC 33277中的Prt C蛋白可以在大肠杆菌体内获得可溶性表达,于是成功构建了胶原酶蛋白Prt C原核表达载体,通过亲和层析和分子筛层析纯化出高纯度且较稳定的蛋白Prt C,并且交联实验证明它在溶液中以多聚体的形式存在,采用蒸汽扩散法进行蛋白结晶条件筛选,观察发现没有晶体形成。本实验初步还证明了Prt C蛋白具有降解胶原酶的活性。结论成功构建了Prt C-p29载体,并且使原核重组表达的Prt C蛋白在大肠杆菌体内获得稳定表达,初步证明其具有胶原蛋白酶活性,为后续解析Prt C的结构奠定了基础。