新疆哈萨克族肥胖儿童菌群人源化动物模型的建立

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目的:利用无菌小鼠建立新疆哈萨克族肥胖儿童菌群人源化(HFA)动物模型,研究哈萨克族肥胖儿童的肠道菌群在无菌小鼠体内的定植规律,为深入研究哈萨克族儿童肥胖的病理生理机制提供新的研究方式。方法:收集新疆哈萨克族7-13岁肥胖儿童新鲜粪便样本,男女各10例。30只无菌级C57BL/6J小鼠,分为实验组(20只)和对照组(10只),均雌雄各半。于无菌小鼠3周龄时,给予实验组灌胃接种哈萨克族肥胖儿童粪便菌悬液,0.1ml/次,隔日一次,共接种3次,且接种时遵循性别一致原则,构建HFA小鼠模型;对照组继续常规饲养于无菌状态下,未进行任何处理。于接种1月后收集实验组和对照组的新鲜粪便样本,利用PCR-DGGE技术对实验组、对照组和哈萨克族肥胖儿童的粪便样本进行检测,分析DGGE图谱中微生物区系的多样性,并将DGGE图谱中清晰的优势条带标记后回收、克隆和测序,以了解哈萨克族肥胖儿童的肠道菌群在实验组小鼠体内的定植情况。结果:(1)在接种哈萨克族肥胖儿童粪便菌悬液的初期,实验组三只雌性小鼠死亡,其余小鼠生存状态良好。(2)实验组小鼠体型正常,解剖时见盲肠大小正常,仅有少量食物残渣滞留;对照组小鼠小腹显著膨胀,解剖时见盲肠异常膨大,内有大量食物残渣。(3)对照组小鼠粪便中细菌检测阴性;哈萨克族肥胖儿童和实验组小鼠的粪便样本PCR-DGGE指纹图谱显示各样本均形成复杂而密集的菌属条带。(4)实验组小鼠的菌群平均丰富度为哈萨克族肥胖儿童的0.76倍,差异有统计学意义(P=0.001);实验组小鼠的菌群多样性指数低于哈萨克族肥胖儿童,而菌群均匀度略高于哈萨克族肥胖儿童,但差异均无统计学意义(P=0.278,P=0.469)。(5)在哈萨克族肥胖儿童肠道菌群中所测得的优势菌属序列,均能在实验组小鼠粪便样本中测得,至少有4种共同菌属:Bacteroides、Firmicutes、Bifidobacterium、Escherichia。结论:哈萨克族肥胖儿童肠道内高达76%的肠道菌群在实验组小鼠体内定植,其主要优势菌群均定植效果良好,实验组小鼠成功模拟了哈萨克族肥胖儿童的肠道菌群环境,构建了哈萨克族肥胖儿童HFA动物模型。
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