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第一部分高糖致肾小球系膜细胞增殖的影响
目的：观察不同浓度的葡萄糖作用48h对大鼠肾小球系膜细胞(RMC)增殖的影响。方法：加入的葡萄糖终浓度分别为0、5、10、20、30、40、50、60、70、80mmol/L，在培养箱内孵育48h后，采用MTT比色法于酶联免疫测定仪490nm波长处测定OD值。结论：根据葡萄糖对系膜细胞增殖作用的量效及时效关系，我们选择30mM浓度的葡萄糖作用48h为最合适的细胞刺激条件。
第二部分山茱萸防治糖尿病肾病活性部位群的筛选
一、体外筛选
目的：运用中药血清药理学方法研究山茱萸活性部位群对高糖致RMC增殖的体外抑制作用，并与总提取物组进行比较，优选山茱萸防治糖尿病肾病的最佳活性部位群组合。方法：采用四甲基氮唑盐(MTT)比色法。结果：山茱萸各有效部位合理组合后，具有不同程度对抗高糖致RMC的增殖作用，并呈一定程度的量效关系。结论：初步确定山茱萸总苷配伍多糖为防治糖尿病肾病的最佳活性部位群。
二、整体筛选
目的：研究山茱萸防治糖尿病肾病的药效物质基础，确定有效部位在药效靶点上的作用，追踪活性部位(群)。方法：分离、纯化山茱萸中环烯醚萜总苷、三萜酸，多糖，以环烯醚萜总苷为基础将各有效部位进行合理组合，以DN模型下的降血糖、降血清尿素氮活性及降肾指数为指标，并与总提取物组进行比较，筛选、确定山茱萸防治DN的有效部位群。结果：山茱萸各有效部位合理组合后，均能延缓小鼠肾病变的进程及降低肾病变的严重程度，其中以山茱萸环烯醚萜总苷+多糖小剂量组效果最佳。结论：环烯醚萜总苷+多糖为山茱萸防治DN的最佳活性部位群。
第三部分山茱萸活性部位群对DN大鼠的作用及其机理研究
一、山茱萸活性部位群对DN大鼠的作用研究
(一)对DN大鼠体重、血糖及糖化血红蛋白的影响
目的：观察山茱萸活性部位群对糖尿病肾病大鼠体重、血糖及糖化血红蛋白的影响。方法：雄性SD大鼠，禁食12小时后，一次性腹腔注射STZ(链脲佐菌素)70mg·kg-1，3小时后恢复饮食。1周后测大鼠空腹血糖值，若血糖值≥16.7mM者则纳入为糖尿病大鼠，并按血糖值随机分为模型组、卡托普利组、山茱萸活性部位群小、中、大剂量组。同期另设一正常组，每日灌胃给药一次，各组连续给药8周。测定大鼠给药后第2、4、8周体重、给药后第4、8周大鼠血糖以及给药后第8周糖化血红蛋白，动态观察糖尿病肾病大鼠的演变及山茱萸活性部位群的防治作用。结果：DN模型组大鼠的体重明显降低，血糖和糖化血红蛋白水平明显增加，与正常组比较有显著差异(P<0.05，0.01)；经山茱萸活性部位群治疗后，DN大鼠的体重下降轻微减慢，血糖及糖化血红蛋白有较明显的下降，与模型组比较差异显著(P<0.05，0.01)。结论：山茱萸活性部位群对糖尿病肾脏病变具有一定的防治作用，抑制ACEs的生成可能是其作用途径之一。
(二)对DN大鼠血清胰岛素及其敏感指数、C肽的影响
目的：观察山茱萸活性部位群对糖尿病肾病大鼠血清胰岛素及其敏感指数、血清C肽含量的影响。方法：雄性SD大鼠，禁食12小时后，一次性腹腔注射STZ(链脲佐菌素)70mg·kg-1，3小时后恢复饮食。1周后测大鼠空腹血糖值，若血糖值≥16.7mM者则纳入为糖尿病大鼠，并按血糖值随机分为模型组、卡托普利组、山茱萸活性部位群小、中、大剂量组。同期另设一正常组，每日灌胃给药一次，各组连续给药8周。于给药后第8周测定大鼠血清胰岛素、c肽，并计算胰岛素敏感指数，观察山茱萸活性部位群对糖尿病肾病的防治作用。结论：山茱萸活性部位群对糖尿病肾脏病变具有一定的防治作用。
(三)对DN大鼠肾功能的影响
目的：观察山茱萸活性部位群对糖尿病肾病大鼠肾功能的影响。方法：雄性SD大鼠，禁食12小时后，一次性腹腔注射STZ(链脲佐菌素)70mg·kg-1，3小时后恢复饮食。1周后测大鼠空腹血糖值，若血糖值≥16.7mM者则纳入为糖尿病大鼠，并按血糖值随机分为模型对照组、卡托普利组、山茱萸活性部位群小、中、大剂量组。同期另设—正常组，每日灌胃给药一次，各组连续给药8周。于给药后第8周，测定血肌酐、尿肌酐、尿微量白蛋白的含量，并计算肾小球滤过率；实验结束时，取双肾去掉包膜称重并计算肾指数。观察糖尿病大鼠的肾脏损伤情况及山茱萸活性部位群的防治作用。结论：山茱萸活性部位群对糖尿病肾病大鼠的肾脏具有保护作用，能延缓其病理学进展。
(四)对DN大鼠胸主动脉、肾组织形态学的影响
目的：从形态学的角度探讨山茱萸活性部位群是否具有防治实验性糖尿病肾病的作用。方法：雄性SD大鼠，禁食12小时后，一次性腹腔注射STZ(链脲佐菌素)70mg·kg-1，3小时后恢复饮食。1周后测大鼠空腹血糖值，若血糖值≥16.7mM者则纳入为糖尿病大鼠，并按血糖值随机分为模型组、卡托普利组、山茱萸活性部位群小、中、大剂量组。同期另设一正常组，每日灌胃给药一次，各组连续给药8周。实验结束后，用光镜观察肾组织及胸主动脉内皮细胞的形态改变等。结论：从山茱萸活性部位群能保护糖尿病肾病大鼠肾脏等组织形态学病理改变，我们推断山茱萸活性部位群能有效防治糖尿病肾病。
二、山茱萸活性部位群对DN大鼠的作用机理研究
(一)对DN大鼠血清脂质的影响
目的：通过对大鼠血清总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度酯蛋白(HDL-C)及低密度酯蛋白(LDL-C)的测定，初步探讨脂质代谢紊乱对由STZ诱导的糖尿病肾病大鼠的影响及山茱萸活性部位群的保护作用。方法：雄性SD大鼠，禁食12小时后，一次性腹腔注射STZ(链脲佐菌素)70mg·kg-1，3小时后恢复饮食。1周后测大鼠空腹血糖值，若血糖值≥16.7mM者则纳入为糖尿病大鼠，并按血糖值随机分为模型组、卡托普利组、山茱萸活性部位群小、中、大剂量组。同期另设—正常组，每日灌胃给药一次，各组连续给药8周。给药8周后，采用试剂盒测定CHOL、TG、HDL-C及LDL-C的含量。结论：山茱萸活性部位群对糖尿病肾病的保护作用可能与其改善脂质代谢紊乱有关。
(二)对DN大鼠肾脏氧化应激的影响
目的：通过DN大鼠肾组织中T-AOC、MDA值的变化分析，初步探讨由STZ诱导的糖尿病肾病大鼠模型的氧化应激现象，以及山茱萸活性部位群保护肾脏作用机制。方法：雄性SD大鼠，禁食12小时后，一次性腹腔注射STZ(链脲佐菌素)70mg·kg-1，3小时后恢复饮食。1周后测大鼠空腹血糖值，若血糖值≥16.7mM者则纳入为糖尿病大鼠，并按血糖值随机分为模型组、卡托普利组、山茱萸活性部位群小、中、大剂量组。同期另设一正常组，每日灌胃给药一次，各组连续给药8周。实验结束后检测肾组织中T-AOC、MDA的活性。结论：氧化应激参与了糖尿病。肾病得发病过程，山茱萸活性部位群对DN的治疗作用部分是通过抗氧化实现的。
(三)对DN大鼠血清NO、NOS和血浆ET、TXB2的影响
目的：探讨山茱萸活性部位群对NO、NOS、ET、TXB2的影响，以了解其对糖尿病肾病大鼠的作用及其作用机理。方法：雄性SD大鼠，禁食12小时后，一次性腹腔注射STZ(链脲佐菌素)70mg·kg-1，3小时后恢复饮食。1周后测大鼠空腹血糖值，若血糖值≥16.7mM者则纳入为糖尿病大鼠，并按血糖值随机分为模型组、卡托普利组、山茱萸活性部位群小、中、大剂量组。同期另设一溶媒对照组，每日灌胃给药一次，各组连续给药8周。实验结束后取血，测定大鼠血清NO、NOS、血浆ET及血栓素TXB2。结论：山茱萸活性部位群可部分恢复NO和ET的动态平衡及血浆TXB2水平，对糖尿病大鼠肾脏病变有一定的保护作用。
(四)对DN大鼠红细胞膜上Ca2+-ATP酶的影响
目的：观察山茱萸活性部位群对糖尿病肾病大鼠红细胞膜上Ca2+-ATP酶活性的作用。方法：雄性sD大鼠，禁食12小时后，一次性腹腔注射STZ(链脲佐菌素)70mg·kg-1，3小时后恢复饮食。1周后测大鼠空腹血糖值，若血糖值≥16.7mM者则纳入为糖尿病大鼠，并按血糖值随机分为模型组、卡托普利组、山茱萸活性部位群小、中、大剂量组。同期另设一正常组，每日灌胃给药一次，各组连续给药8周。实验结束后采用ATP酶试剂盒及考马斯亮兰蛋白试剂盒测定糖尿病大鼠红细胞膜上Ca2+-ATP酶活性的改变。结论：山茱萸活性部位群可以通过改善红细胞膜上Ca2-ATP酶活性对糖尿病时肾脏产生保护作用。
第四部分山茱萸活性部位群急性毒性试验
目的：测定一日内一次灌胃给予山茱萸活性部位群后小鼠及大鼠所产生的急性毒性反应和死亡情况。方法取禁食(不禁水)12小时的清洁级ICR小鼠和大鼠，雌雄各半。以最大浓度、最大容积一次灌胃给药，观察记录受试动物活动、行为及死亡等情况。结论：山茱萸活性部位群灌胃给药安全度较大。