【摘 要】
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肌肉生长抑制素(Myostatin)是一种抑制动物骨骼肌生长发育的负调控因子,在肌细胞的形成过程中有着重要的生理功能.本课题通过分子生物学手段获得了猪、鸡、鸭Myostatin成熟区
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肌肉生长抑制素(Myostatin)是一种抑制动物骨骼肌生长发育的负调控因子,在肌细胞的形成过程中有着重要的生理功能.本课题通过分子生物学手段获得了猪、鸡、鸭Myostatin成熟区DNA的克隆,并在真核生物甲醇酵母中分泌融合表达了猪、鸡Myostatin蛋白,目的是为日后开发利用Myostatin基因,生产Myostatin疫苗阻断其生理效应从而提高动物产肉率提供前期的物质准备,同时也为今后开展其他外源基因的真核表达研究提供了技术支持.从金华猪、萧山鸡和番鸭的全血中抽提各自的基因组DNA,经PCR扩增得到各自Myostatin成熟区DNA片段,以pUCm-T Vector为载体,克隆了Myostatin的成熟区段,并进行了测序.将筛选到的猪、鸡Myostatin成熟区DNA的阳性克隆子经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后,连接入经同样酶消化的穿梭载体pPIC9K Vector(可在大肠杆菌和甲醇酵母之间穿梭)中,构建重组表达载体Myostatin-pPIC9K,然后通过电转仪将线性化的重组表达载体(Bgl Ⅱ酶切)转化入酵母中,使之与酵母染色体DNA进行同源重组,从而将目的基因整合入酵母染色体中稳定传代并用甲醇诱导其表达,最后用SDS-PAGE凝胶电泳检测表达的Myostatin蛋白.用甲醇酵母表达系统表达目的蛋白的主要优点是能对表达的蛋白质进行翻译后加工修饰处理,从而使表达出的蛋白具有生物活性,且能将目的蛋白分泌表达至培养液中,使后续的纯化工作大为便利.
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