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食管癌是最致命的恶性肿瘤之一。它是导致肿瘤死亡的第六大原因,也是世界上第八大最常见的肿瘤。主要是因为它极难早期诊断,侵袭能力强,因此预后差以及存活率低。其五年存活率约为15%-25%。更糟糕的是,随着世界范围内人口老龄化的增长,食管癌的发病率也正在逐年上升。中国是食管癌发病率最高的地区之一,尤其以中国河南省安阳市最高。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)为长度大于200个核苷酸,不具有编码蛋白功能的RNA分子。报道表明,它可以通过与DNA、染色质、蛋白质、RNA等大分子相互作用促进或抑制肿瘤的发生、侵袭和转移,其复杂的作用机制是目前研究的重点和难点。据报道,LncRNAH19在成人组织中表达量低或不表达,但在多种肿瘤中高表达,如大肠癌、乳腺癌、膀胱癌等,且与肿瘤的发生发展密切相关。因此LncH19有可能具有肿瘤早期诊断和预后判断的标志物的临床价值。本课题大规模地使用ISH方法检测食管鳞癌中H19的表达水平,旨在探讨其在食管癌中的临床病理作用。其次运用生物信息学分析方法预测LncRNA H19的靶向miRNA,探讨H19在食管鳞癌中可能的作用机制。方法1.采用原位杂交(ISH)方法,检测121例食管鳞癌组织标本中LncRNA H19的表达,分析H19表达与患者临床病理学参数和总生存期(Overall Survival,OS)之间的关系。2.应用SPSS17.0软件进行统计学分析。采用独立样本t检验或单因素方差分析、卡方检验等分析H19表达与临床变量间的关系;多因素Logistic回归模型分析食管癌的危险因素;采用kaplan-meier和log-rank检验计算和比较生存期;采用cox按比例回归模型预测食管癌独立预后因素。3.采用在线生物信息学工具LncBase Predicted v.2预测在食管鳞癌样本中可与LncRNAH19互补配对结合的靶向miRNA,设置评分等筛选条件后得到的miRNAs标记为Pr-miRNA。使用R语言进行H19和miRNA的相关性分析,设置阈值,并将得到的miRNAs标记为Re-miRNA。通过网络工具Bioinformatics&Evolutionary Genomics 筛选出 Pr-miRNA 与 Re-miRNA 交集的靶向 miRNA 并利用LncBase Predicted v.2找出靶向miRNA与H19的结合位点。结果1.121例食管鳞癌组织标本均显示H19阳性表达。一年内死亡患者63/121(52.1%),其中H19表达强阳性45例(37.2%),弱阳性6例(5%);五年及以上生存患者58/121(47.9%),其中H19表达强阳性18例(14.9%),弱阳性20 例(16.5%)。2.LncRNAH19表达水平与生存时间(P=0.001)呈负相关性,与肿瘤大小(P=0.002)及肿瘤UICC分期(P=0.001)呈正相关性。以上结果提示H19表达水平与患者生存时间、食管鳞癌恶性程度相关。3.logistic回归模型分析显示,UICC分期、淋巴结转移和H19表达强度是影响食管鳞癌患者生存的主要危险因素(P<0.05)。Cox比例风险模型显示H19表达强度、UICC分期、淋巴结转移均可作为食管鳞癌患者预后的独立影响因素(P<0.001)。4.生物信息学工具 LncBase Predicted v.2 及 Bioinformatics&Evolutionary Genomics 筛选出 hsa-miR-192-3p、hsa-miR-194-5p、hsa-miR-625-5p 为与 H19负相关且靶向结合的miRNAs。结论LncRNAH19在食管鳞癌组织中呈高表达,表达强度与UICC分期及肿瘤大小呈正相关。且Kaplan-Meier和log-rank检验显示,H19的表达水平与患者生存期呈负相关(P<0.001)。进一步的logistic回归分析和Cox比例风险模型证实LncRNAH19在食管鳞癌组织中过表达、UICC分期、淋巴结转移均为食管癌的危险因素。这些发现强调了 H19的高表达与ESCC恶性肿瘤相关,可能导致患者临床病理特征差,预后差,并对患者的生存产生了负面影响。生物信息学分析提示 LncRNA H19 可与 hsa-miR-192-3p、hsa-miR-194-5p、hsa-miR-625-5p靶向结合,在食管鳞癌发展过程中可能发挥调控作用,同时提示有必要对食管鳞癌H19靶向治疗机制进行深入的研究。