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疫苗佐剂能够非特异性提高机体对抗原的适应性免疫应答，在疫苗的接种免疫过程中发挥辅助作用:同疫苗一起使用，能诱发机体产生长期、高效的特异性免疫反应，提高机体保护能力，降低疫苗的免疫用量，降低疫苗成本、减少疫苗所引发的不良反应。近年来，为适应新型疫苗的需求，佐剂已经从传统、单一的形式向新型、多元化形式发展，尤其用于黏膜疫苗、DNA疫苗及肿瘤疫苗的佐剂研究成为热点。其中CPG寡核苷酸(CPG ODN)是目前研究的热点，细菌DNA中含有大量非甲基化CPG基序，因此细菌DNA和CPG ODN统称为CPG DNA。BCG-CPG-DNA是从减毒牛型分枝杆菌卡介苗中提取的基因组DNA片段，分子量大于1Kbp，富含未甲基化的CPG基序，纯度高、质量可控。 本研究通过应用BCG-CPG-DNA佐剂作用于小鼠后，观察注射后不同时间点脾脏内淋巴细胞比例变化、血清中细胞因子的变化、和注射部位免疫细胞的募集情况来分析探索BCG-CPG-DNA佐剂的作用机理，通过与铝佐剂及复合佐剂BC02的比较对其佐剂效应特点做出初步评价。 一、小鼠脾脏淋巴结淋巴细胞分型 本研究通过对比不同佐剂作用于小鼠后不同时间点脾脏淋巴结内淋巴细胞比例的变化来探索BCG-CPG-DNA佐剂的作用机理和评价其佐剂效应特点。用PBS作为机理探索对照，用铝佐剂和复合佐剂BC02作为评价对照，分别于注射后6h、12h、24h、48 h、72 h和96 h无菌获取脾脏内淋巴细胞，用流式细胞仪检测脾脏内淋巴细胞比例。结果显示:BCG-CPG-DNA进入机体后能同时促进B淋巴细胞和T淋巴细胞的活化、增殖和分化，介导机体内Th1免疫应答和Th2免疫应答。同铝佐剂复合使用，比两者单独使用对体内免疫应答有更强的介导作用。 二、小鼠注射部位免疫细胞募集 本研究通过对不同佐剂作用于小鼠后不同时间点注射部位肌肉组织中免疫细胞的募集情况来探索BCG-CPG-DNA佐剂的作用机理和评价其佐剂效应特点。用PBS作为机理探索对照，用铝佐剂和复合佐剂BC02作为评价对照，分别于注射后24 h、48 h、72 h和96 h获取注射部位肌肉组织，冰冻切片，经MHC-Ⅱ类分子特异性荧光染色、HE染色观察注射部位免疫细胞募集情况和炎性细胞浸润情况。结果显示:BCG-CPG-DNA进入机体后能引起注射部位肌肉组织炎性细胞浸润，并能够在注射部位募集DC等免疫细胞，促进抗原提呈和机体内免疫应答过程;对免疫细胞的募集速度大于铝佐剂但对免疫细胞的募集能力低于铝佐剂，同铝佐剂复合使用，有更强更迅速的免疫细胞募集能力。 三、小鼠血清细胞因子的检测 本研究通过对不同佐剂作用于小鼠后不同时间点血清中细胞因子浓度的变化来探索BCG-CPG-DNA佐剂的作用机理和评价其佐剂效应特点。用未处理的小鼠血清细胞因子浓度作为正常值参考，用PBS作为机理探索对照，用铝佐剂和复合佐剂BC02作为评价对照，分别于注射后6h、12h、24 h、48 h、72 h和96 h收集血清，用多因子试剂盒检测细胞因子IL-17、IL2、IL-5、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α、G-CSF、IP-10和MCP-1浓度。结果显示:BCG-CPG-DNA进入机体后能明显促进和刺激血液中各种细胞因子浓度水平的升高;相比于铝佐剂，BCG-CPG-DNA进入机体短时间内即可刺激机体产生高浓度水平的细胞因子，作用更加迅速和及时;同铝佐剂复合使用，比两者单独使用对血清细胞因子的产生有更强的促进作用。 四、结论 BCG-CPG-DNA佐剂作用于机体能引起注射部位以DC为主的免疫细胞的募集，介导机体内Th1免疫应答和Th2免疫应答，促进血清和免疫相关的细胞因子浓度升高。作用于机体后具有引起注射部位炎性细胞浸润、快速介导免疫应答的特点，同铝佐剂复合使用能产生更强更持久的佐剂效应。