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副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPs)是猪Glasser’s病的病原菌,临床上以纤维蛋白性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征。HPs属于巴斯德菌科(Pastteurellaceae Pohl,1981) 嗜血杆菌属(Haemophilus winslow et al.,1917)。HPs是一种不运动、NAD依赖型、革兰氏阴性细小杆菌。近年来,随着我国规模化养猪场的发展,副猪嗜血杆菌感染有明显增加趋势,已成为猪场保育仔猪发病率和死亡牟增加的重要原因之一,并给养猪业造成重大经济损失。本文从HPs的诊断、流行病学及病理学3个方面进行了系统研究,结果如下: 1、副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立:副猪嗜血杆培养条件比较苛刻,常规生化方法比较烦琐。本研究根据Oliveira等发表的副猪嗜血杆菌16S rRNA基因特异性PCR引物序列,合成一对PCR引物,通过PCR反应条件的优化、特异性和敏感性的测定、及细菌DNA提取方法的选择,建立了一种快速、简洁、准确的PCR方法用于检测副猪嗜血杆菌。PCR扩增片段为编码16S rRNA的DNA片段,大小为822bp,最小检测量为1080个HPs细菌。与大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和链球菌无特异性反应。用该法检测人工感染发病仔猪不同内脏组织悬液及自然感染仔猪肺组织,结果为:用来自试验感染猪的肺脏、心脏和肾脏抽提的DNA做模板,扩增的结果为阳性;而用试验感染猪的肝脏、脾脏、脑和来自自然感染猪的临床样品抽提的DNA做模板,扩增的结果为阴性。证明以肺脏组织为病料,通过细菌分离培养,再用PCR法鉴定分离箇体、可有效地用于HPs的诊断。 2、副猪嗜血杆菌流行病学调查:对2003年11月份～2005年4月份送检的159个患病猪场仔猪肺脏进行了副猪嗜血杆菌分离培养和PCR鉴定,结果为该菌阳性猪场次76个,占48%。流行病学结果为,该病发生与季节、猪的日龄和地区有关。该研究结果表明,副猪嗜血杆菌已在我国不同地区广泛流行。 3、副猪嗜血杆菌人工感染猪病理学观察:用三个副猪嗜血杆菌分离株通过滴鼻途径分别感染断奶仔猪,结果均可复制出临床疾病。发病仔猪临床表现为体温中度升